总之方法很多,这里不能一一详细介绍,你可查一下相关实验方法的文献,要根据你的具体情况而定,本人认为如果条件许可,最好通过流式检测,误差小。
sabc128:假如用HE 染色,凋亡细胞和整个细胞数目怎么确定?
youngtiger:细胞爬片或涂片的HE染色结果判断:凋亡细胞变圆、边笑,细胞核固缩、碎裂,染色体被染成深蓝色或蓝黑色,可见细胞膜皱折、卷曲,甚至芽生形成膜包裹的凋亡小体。正常细胞经染色后仍保持细胞原有的生长形状,核规整,染成均一蓝色。而坏死细胞肿胀,可见细胞膜的连续性破坏,核染色体染成很淡的蓝色甚至消失。
可用凋亡指数进行计数,即随即选择约10-20个视野,计数凋亡细胞百分率。
woodsword:有一篇文章,可能对你有点用。
Acta Physiologica Sinica, October 25, 2004, 56 (5): 609-614
xdb86:常规染色(HE, Giemsa, Wright)普通光学显微镜观察和透射电镜观察要计算凋亡率是很困难的,基本上不可行。常规染色下要出现明确的凋亡小体你才可以说该细胞凋亡了,早期的和不出现凋亡小体的凋亡无法辨认。透射电镜观察的细胞数太少,有时也不易与坏死区分,可以定性,也不宜计算凋亡率。
琼脂糖凝胶电泳可以比较不同组别的凋亡程度,但不能得出凋亡率。
TUNEL法太敏感,有DNA断裂的细胞应该都能着色,所以很多人做出的结果不是绝大部分阳性就是全部不着色(可能试剂问题或实验操作问题)。
PI单染色法流式分析:多用于检测细胞周期分布。早期凋亡细胞也可以检测到,表现为亚二倍体峰。
我觉得检测凋亡率最好的方法还是Annexin-V-FITC/PI双染色、流式细胞仪分析法,可以得出明确的凋亡率,并区分坏死细胞,其原理是:在细胞凋亡过程中伴随着一系列的形态特征改变,细胞膜的改变是这些特征中较早出现的一种。在凋亡细胞中,细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的外侧。Annexin-V是一种35-36 KD的钙粒子依赖的磷脂结合蛋白,它对PS具有较高的亲和力。细胞凋亡时,可以和外翻的PS结合,从而可以检测凋亡的细胞。发生坏死的细胞其细胞膜上的PS也外翻,因而也会阳性。因此,常用的凋亡试剂盒除了采用Annexin-V标记之外,还会加一种DNA染料,常用的有PI和7-AAD,由于坏死的细胞膜通透性增高,染料可以进入细胞内和DNA结合,从而可以发荧光,区分出坏死细胞。
LXMSUNLIGHT:
1、流式细胞术检测细胞凋亡率
2、AO/EB荧光染色 (Wang CY, James E, Jim L. Spontaneous apoptosis in human colon tumor cell lines and the relation of WT P53 to apoptosis. Chinese Medical Journal, 1996;109:537-541)
方法略有改进:将处于对数生长期的2株细胞制成细胞悬液,调成1×109/L细胞密度加入细胞培养瓶,待细胞贴壁后加入2mg/L As2O3药物. 置37℃ 50mL/L CO2孵箱培养,按预定时间,将细胞全部收集离心,弃上清加入PBS洗十次,制成细胞悬液,吸200μL,加入8Μl AO/EB染液,充分混匀,滴于玻片上,分别计数. 早期凋亡细胞(VA)核染色质着绿色,呈固缩状或圆珠状. 晚期凋亡细胞(NVA)核染色质着桔红色,呈固缩状或破裂状. 坏死细胞(NVN)核染色质着桔红色,呈正常细胞结构. 活细胞(VN)核染色质着绿色,呈正常细胞结构. 细胞凋亡率按以下公式计算:
细胞凋亡率%=VA+NVA/VN+NVN+VA+NVA ×100%
如何检测石蜡包埋的组织切片标本的凋亡情况
sorry:本人想检测石蜡包埋的组织切片标本的凋亡情况,除了传统的Tunel法以外,还有什么其他的方法吗?
xufei19750125:也可以用免疫组化法检测Fas、Bcl-2等凋亡分子!