先确定是不是细菌污染。第四档一般是40X物镜,这个倍率下看到的有可能是一些细胞状态不好分泌的杂质,也有些是细胞凋亡后的碎片。这些小黑点会有布朗运动,看上去跟细菌一样会动,区别在于细菌的形态是每个点都几乎一样,而且能看到某些黑点会向某一方向移动较长的距离。碎片一般是在原地振荡。如果用CKX51这类观察用显微镜看不清,会换成镜头更好的IX71,基本上都能清楚分出来。如果确实是细菌污染,就像danielsu同学说的,换批好细胞,换掉培养基。离心是没有用的。而且受到细菌污染的细胞,状态会发生改变,实验做出来的结果不一定真实或者难于重复。特别珍贵的细胞,可以参考细胞培养的一些参考书,上面会有更详细的如何用高浓度抗生素除菌和鉴定的方法。这是个非常耗时耗力耗成本。还不如重新买一株回来。
大家都说了很多方法了,我记得去以前带的师妹做细胞老是污染,后来我看她操作的时候发现她的手上戴了手链,去掉手链后就没有再污染了。你可以注意一下。
1、要明确是否是污染,有时候培养基中有小黑点不一定是污染,比如细胞代谢排泄物,培养基析出物等,但是这些一般不会影响细胞增殖和状态,更重要的是如果是污染,延长培养时间,污染程度会很快加重,这时就比较容易鉴别了。 你说的小黑点动,不知道是真么样的。菌的运动一般比较剧烈,在高倍镜下,即使不是菌,由于布朗运动的存在,也会看着动的。2、所有培养用品更新。该高压的高压,该扔的扔吧,都有过这种经历,没办法。如果是培养基污染,过滤的办法是不可靠的。因为过滤还菌量较高的液体本身带入过滤后液体菌的可能性就很大的(菌会以气凝胶的形式漂移的),另外,菌量高是,过滤到最后,随着压力增大,会有滤器小孔的损坏,使过滤失去效果。3、如果换了东西还不行,考虑冻存的细胞是不是又问题就很有必要了。几点意见希望能帮到你
清理你的液氮罐……液氮罐里是不是同时保存着组织样本?或者有存了很长时间的样本?这些都会污染细胞的!
如果还有细胞的话,就重新复一管吧,用新的血清。不知道你的细胞用不用消化,我曾经遇到过酶污染的情况,找到最后才找出来原因。