悬浮细胞的传代

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孙玉琦
赛库生物技术支持

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什么是悬浮细胞?
细胞生长不依赖于支持物表面,在培养基中悬浮生长,如淋巴细胞等。

悬浮细胞传代
悬浮细胞在培养基中悬浮生长,因此不需要胰酶消化脱落的过程,可以直接进行传代操作,方法简单,接下来就让我们一起看看悬浮细胞传代的具体操作吧!



悬浮细胞传代—实验准备

1、将移液枪、培养瓶、巴氏吸管、15mL离心管等物品提前放入生物安全柜中,紫外照射30min消毒灭菌;

2、完全培养基,预热至37度备用。

 

悬浮细胞传代—实验方法

主要有两种传代方法,换液传代法和离心传代法

换液传代法—实验步骤

1、本次以T25瓶培养的u2932细胞株为例,显微镜下观察细胞密度达到80%-90%时,进行传代,拍照并记录细胞状态。

2、培养瓶表面消毒后转移至生物柜安全中。

3、用巴氏吸管按1:2吸取细胞接种到新的T25瓶中,并补充等量的新鲜完全培养基,继续培养。


离心传代法—实验步骤

1、本次以T25瓶培养的u2932细胞株为例,显微镜下观察细胞密度达到80%-90%时,进行传代,拍照并记录细胞状态。

2、培养瓶表面消毒后转移至生物安全柜中。

3、收集细胞悬液转移到15mL离心管中。

4、800rpm, 离心 5 min,弃去培养上清。

5、使用新鲜的完全培养基重悬细胞。

6、移液枪吸取适量细胞悬液,接种到新的培养瓶中,再加入适量的完全培养基,最后转移至二氧化碳培养箱中继续培养。