【自用收藏】细胞冻存操作技术+冻存注意事项

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孙玉琦
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为了避免污染造成的损失,最小化连续细胞系的遗传改变,以及避免有限细胞系的老化和转化,需要冻存哺乳动物细胞。冻存细胞前,细胞应该特性化并检查是否污染。冻存细胞应做好标记和归档,以便后续使用。


悬浮细胞

①计数将要冻存的活细胞。细胞应处于对数生长期。

②1200rpm,离心5min沉淀细胞,使用移液管去除上清。

③以5×106~1×107cell/mL密度,在冻存液中再次重悬细胞。

④分装进冻存管,将冻存管置于4℃冰箱中15~30分钟。

⑤将冻存管放入程序冻存盒中,-80℃冰箱过夜后,转移到液氮中贮存。

 

贴壁细胞
 

①按照传代操作消化细胞,获得细胞悬液并计数。

②800~1000rpm,离心5min沉淀细胞,使用移液管去除上清。

③以1×106~5×106cell/mL的密度,在冻存液中重悬细胞。

④将细胞分装进冻存管,将冻存管置于4℃冰箱中15~30分钟。

⑤将冻存管放入程序冻存盒中,-80℃冰箱过夜后,转移到液氮中贮存。

 

#注意
 
01

按照ATCC提供的细胞冻存液配方,在冻存前配制即可。

02

冻存的细胞应做好标记,并记录贮存位置,方便后续查找并使用。