贴壁细胞传代

1、本次以T25瓶培养的HeLa细胞株进行演示，显微镜下观察细胞状态，贴壁细胞密度达到80%时即可进行传代。

2、轻轻吸去旧的培养基。

3、加入2~3mL PBS缓冲液，轻轻摇晃，清洗细胞，随后吸去PBS缓冲液。

4、加入1mL 0.25%胰酶EDTA溶液，倾斜晃匀，吸去大部分胰酶，覆盖所有细胞后置于37°C培养箱静置消化，消化时间为1min到5min，具体消化时间看细胞生长情况而定。

5、消化1min(HeLa)左右，显微镜下观察细胞消化情况，细胞皱缩变圆后，可倾斜培养瓶并轻轻拍打瓶壁，细胞成流沙状完全脱落，即可判断细胞消化完成。  

6、加1mL含有血清完全培养基终止消化，沿瓶壁将细胞轻柔吹落，均匀吹散。

7、将细胞悬液移入50mL离心管中， 离心转速1000转，离心5min，收集细胞团。

8、吸走上清液，向细胞沉淀中加入完全培养基轻轻吸打混匀，吹打过程中尽量不要出现气泡。 

9、使用细胞计数仪进行细胞计数，获得细胞浓度。

10、依据细胞总量选择合适的传代比例，本次演示传代比例为1：3，即从1瓶T25传代至1瓶T75。

11、加入15mL完全培养基，轻柔吹匀后，将所有液体转移至新的T75培养瓶中，均匀平铺，并做好标记，最后转移至5% 二氧化碳培养箱中进行培养。