贴壁细胞传代

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孙玉琦
赛库生物技术支持

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传代是细胞培养最基本的操作,也是最容易出问题的环节。下面,赛库生物技术老师为大家演示了贴壁细胞的传代操作流程。欢迎点击视频进行观看!

贴壁细胞传代—实验准备

1、将50mL离心管、巴氏吸管、T25细胞培养瓶、PBS缓冲液、移液枪、电动移液器、桌面洗液器等物品提前放入生物安全柜中,紫外照射30min消毒灭菌;

2、细胞完全培养基、0.25%胰酶EDTA溶液从4°C冰箱中取出后,复温至室温备用。

 

贴壁细胞传代—实验步骤

1、本次以T25瓶培养的HeLa细胞株进行演示,显微镜下观察细胞状态,贴壁细胞密度达到80%时即可进行传代。

2、轻轻吸去旧的培养基。

3、加入2~3mL PBS缓冲液,轻轻摇晃,清洗细胞,随后吸去PBS缓冲液。

4、加入1mL 0.25%胰酶EDTA溶液,倾斜晃匀,吸去大部分胰酶,覆盖所有细胞后置于37°C培养箱静置消化,消化时间为1min到5min,具体消化时间看细胞生长情况而定。

5、消化1min(HeLa)左右,显微镜下观察细胞消化情况,细胞皱缩变圆后,可倾斜培养瓶并轻轻拍打瓶壁,细胞成流沙状完全脱落,即可判断细胞消化完成。  

6、加1mL含有血清完全培养基终止消化,沿瓶壁将细胞轻柔吹落,均匀吹散。

7、将细胞悬液移入50mL离心管中, 离心转速1000转,离心5min,收集细胞团。

8、吸走上清液,向细胞沉淀中加入完全培养基轻轻吸打混匀,吹打过程中尽量不要出现气泡。 

9、使用细胞计数仪进行细胞计数,获得细胞浓度。

10、依据细胞总量选择合适的传代比例,本次演示传代比例为1:3,即从1瓶T25传代至1瓶T75。

11、加入15mL完全培养基,轻柔吹匀后,将所有液体转移至新的T75培养瓶中,均匀平铺,并做好标记,最后转移至5% 二氧化碳培养箱中进行培养。


贴壁细胞如何传代?您学会了吗?我们下期视频再见!如需更详细的技术指导可在下方留言或直接发送邮件至info@cellcook.com,我们会第一时间为您解答,感谢您的支持!