慢病毒(Lentivirus)是一类改造自人免疫缺陷病毒(HIV)的病毒载体,基因组为 RNA,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。慢病毒基因组进入细胞后,在细胞浆中反转录为 DNA,形成 DNA 整合前复合体,进入细胞核后,DNA 整合到细胞基因组中。整合后的 DNA 转录成 mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白;或产生小 RNA。慢病毒介导的基因表达或小 RNA 干扰作用持续且稳定,并随细胞基因组的分裂而分裂(图 1)。
图 1 慢病毒作用机制
慢病毒与腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒载体相比,具有宿主范围广,免疫原性低,基因容量大,可以长期表达等特点。慢病毒主要用于难转染细胞的感染、稳转株的制备等。难转染的细胞主要包括干细胞、免疫细胞(如 DC 细胞)、肿瘤细胞等,此外,慢病毒还可以感染仓鼠胚胎制备转基因动物。
慢病毒感染细胞时,由于细胞的来源、代数和细胞状态等因素的影响,MOI 值在不同实验室也略有差异,下面我们提供公司部分细胞的慢病毒 MOI 感染参数,供实验参考(以下数据是细胞感染效率在 80% 细胞状态良好的情况下获得的):
表 1 不同细胞的 MOI 值参考
细胞名称 | 细胞来源 | MOI 值 |
A-375 | 人恶性黑色素瘤细胞 | 10 |
A549 | 人肺腺癌细胞 | 10 |
PANC-1 | 人胰腺癌细胞 | 10 |
NCI-H1299 | 人肺腺癌细胞 | 10 |
Saos-2 | 人骨肉瘤细胞 | 10 |
MDA-MB-231 | 人乳腺癌细胞 | 40 |
SW620 | 人结肠癌细胞 | 40 |
T24 | 人膀胱癌细胞 | 20 |
Ca Ski | 人宫颈癌肠转移细胞 | 10 |
MG-63 | 人骨肉瘤细胞 | 50 |
… | … | … |
和元上海慢病毒的生产和质控采取了国际学术界公认的标准流程,采用三质粒系统在 293 T 细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速离心纯化,并通过 qPCR 对病毒基因拷贝进行滴定。一般情况下我们的慢病毒的滴度在 108~109 TU/ml,完全可以满足各类实验的使用要求。
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