慢病毒包装———架起基因和功能研究的桥梁

腺病毒载体操作手册

   2013-03-18
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一、实验流程
制备腺病毒穿梭质粒，分别高纯度无内毒素抽提腺病毒穿梭质粒和骨架质粒，共转染293A细胞，转染后6h更换为完全培养基，培养十几天，在中间四五天左右更换一次新鲜培养基，然后收集细胞和1ml培液置于15ml离心管后，液氮/37度冻融三次（冻-融要彻底），2000rpm离心5分钟，取上清即为病毒液初代原液。连续三代反复扩增收集病毒后，行病毒的大量扩增，然后通过CsCl密度梯度离心-透析联用法纯化病毒。
 

二、实验材料
（一）腺病毒载体、包装细胞和菌株该病毒包装系统为两质粒系统， 组成为穿梭质粒（ 包括pHBAd-CMV-IRES-GFP,pHBAd-CMV-IRES-RFP,pHBAd-U6-GFP,pHBAd-U6-RFP）和骨架质粒pBHGlox（delta）E1,3Cre。其中穿梭质粒pHBAd-CMV-IRES-GFP 和pHBAd-U6-GFP 能表达绿色荧光蛋白（GFP）。pHBAd-CMV-IRES-RFP 和 pHBAd-U6-RFP 能表达红色荧光蛋白（RFP）。
1、载体信息
1) 腺病毒克隆载体图谱如下：

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编辑： snail    来源：丁香园

关于汉恒

汉恒生物科技（上海）有限公司专注于为广大科研工作者提供腺病毒、慢病毒及逆转录病毒包装、细胞稳定株筛选服务。汉恒 生物是全国唯一一家可以现货供应预装基因慢病毒及腺病毒产品的公司（一般2周到货），也是全国第一个能够提供400多种腺病毒产品和腺病毒库的生物公司。 公司凭借一流的实验设备和经验丰富的实验工程师，先后为3000多名科研工作者提供品质卓越的服务。为了提高服务质量，公司组建了强大的技术咨询团队，为 每一个客户制定最适合的实验方案，并严格把关服务质量，为每一位客户创造最大价值。
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