蛋白酶K溶液(10mg/ml)

作用及原理：
⒈溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II－NaOH－SDS液：
NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
蛋白酶K溶液(10mg/ml)在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。

根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理，可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一，盐析即在高浓度Nacl溶液中，蛋白质析出的现象。原理如下
（1）Nacl溶液与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
（2）Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出；
2.不同浓度下DNA分子构象（三维结构）不同，不同的构象溶解度也不同。
（1）当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出；
（2）DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高；

3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液，使得蛋白质析出，而DNA溶解度较大，通过高速离心，取上清并去除沉淀，进而去除蛋白质。
产品名称：蛋白酶K溶液(10mg/ml)
英文名称:ProteinaseKSolution(10mg/ml)
储存条件:-20℃，有效期1年
单位:瓶
产品说明： Proteinase K，中文名为蛋白酶K。进口产品配置，不含DNas，不含RNase，可直接使用。可以用于消化各种蛋白。用于各种常见的分子生物学、细胞生物学等相关实验，例如基因组DNA抽提、酶的消化去除等。 酶活力，;30U/mg。在37ºC、pH 7.5条件下，每分钟可水解底物酪蛋白生成1 µmol酪氨酸所需蛋白酶K的量，定义为一个单位（U）蛋白酶K酶活力。 在很宽的pH范围内有效，有效的pH范围为pH4.0-12.5，最佳pH范围为pH7.5-8.0。蛋白酶K的最佳反应温度为65℃，但在65℃或更高的温度蛋白酶K自身的也非常迅速地降解。很多时候反应温度选择50-55℃。
在0.2-1%SDS或约10mM尿素存在的情况下，蛋白酶K显示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作浓度为0.05-1mg/ml，根据所用缓冲液是否含有SDS、尿素、pH是否适合、温度是否适合等因素确定具体的工作浓度。 常用浓度的EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、盐酸胍对蛋白酶K的活力影响不大。
DNA沉淀剂：
原则：不与DNA反应，对其无影响。
1.纯乙醇（二倍体积比）；效率高，需要放置的时间短，在公司用Kit提取的时候，没有放置直接进行下一步；确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇，价格相对于纯乙醇便宜，但是会损失DNA；
3.异丙醇（0.6倍体积）；
（1）普通细胞上清液体，静止15-30min即可沉淀；
（2）对于含量低，或者组织（比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA），则最好在-20℃放置2h或者以上，
本人提取肝脏组织DNA时候，最长时间放置了三天，对结果并无影响；上周提取细胞中cccDNA的时候，室温放置了15min，结果提出的DNA含量也挺高的，而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高，所以时间短点也可以，但是如果时间不是很着急，还是按照规定的时间来做比较保险。
以下是公司正在热销的产品：
GSTA2 Polyclonal Antibody 种属 Xenopus│sp.英文: GSTA2 Polyclonal Antibody 模式菌株no
AGFG1 Polyclonal Antibody 种属 Alternaria│mali Roberts英文: AGFG1 Polyclonal Antibody 模式菌株no
PSMD2 Polyclonal Antibody 种属 Ceratocystis│fimbriata Ellis & Halst.英文: PSMD2 Polyclonal Antibody 模式菌株no
MAP3K20 Polyclonal Antibody 种属 Fusarium│oxysporum f.sp. vasinfectum W.C. Snyder & H.N. Han宿主: Rabbit 模式菌株no
SMCHD1 Polyclonal Antibody 种属 Botryosphaeria│sp.英文: SMCHD1 Polyclonal Antibody培养方法
ATOH1 Polyclonal Antibody 种属 Boletus│sp.英文: ATOH1 Polyclonal Antibody应用领域食用
TOR1A Polyclonal Antibody 种属 Drepanopeziza│punctiformis Gremmen英文: TOR1A Polyclonal Antibody 模式菌株no
BMPR1B Polyclonal Antibody 种属 Sphaeropsis│sapinea (Fr.) Dyko & B. Sutton英文: BMPR1B Polyclonal Antibody 模式菌株no
APG5L Polyclonal Antibody 种属 Pestalotia│sp.英文: APG5L Polyclonal Antibody 模式菌株no
CNPY3 Polyclonal Antibody 种属 Candidatus Phytoplasma│ziziphi英文: CNPY3 Polyclonal Antibody 模式菌株no
FLT4 Polyclonal Antibody 种属 Ralstonia│solanacearum (E. F. Smith) Yabuuchi et al.宿主: Rabbit 模式菌株no
EDA Polyclonal Antibody 种属 Ganoderma│sp.英文: EDA Polyclonal Antibody培养方法
DNAJA1 Polyclonal Antibody 种属 Pleurotus│cystidiosus O.K. Mill.英文: DNAJA1 Polyclonal Antibody培养方法
HDAC3 Polyclonal Antibody 种属 Cryphonectria│parasitica (Murrill) M. E. Barr英文: HDAC3 Polyclonal Antibody 模式菌株no
TCAP Polyclonal Antibody 种属 Melanconium│oblongum Berk.英文: TCAP Polyclonal Antibody 模式菌株no
HSPA1A Polyclonal Antibody 种属 Phytophthora│cinnamomi Rands宿主: Rabbit 模式菌株no
蛋白酶K溶液(10mg/ml)人可溶性细胞间粘附分子1elisa检测试剂盒
英文名称:Human ICAM-1 ELISA KIT
反应性:Human
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
灵敏度:15 pg/ml
检测目标:ICAM-1
应用:Sandwich ELISA