如何正确操作人玻连蛋白（VTN）ELISA试剂盒？

    如何正确操作人玻连蛋白（VTN）ELISA试剂盒？

BS-1738

人玻连蛋白（VTN）ELISA试剂盒

    人玻连蛋白（VTN）ELISA试剂盒的操作步骤主要基于‌双抗体夹心法‌，其核心流程包括包被抗体、抗原结合、检测抗体、显色反应等关键步骤‌。以下是具体操作指南：

    一、实验前准备

    试剂盒检查‌：确认试剂盒包含预包被抗体的酶标板、标准品、检测抗体、显色液（如TMB）及终止液等‌。

    样本处理‌：血清或血浆样本需离心去除杂质，避免溶血或脂血干扰‌。

    仪器校准‌：酶标仪预热至450nm波长，并设置630nm校正波长‌。

    二、操作步骤详解

    1.‌包被抗体（预包被步骤）‌

    商品化试剂盒通常已预包被抗体，无需手动操作‌。

    若需自行包被，将抗体用碳酸盐缓冲液（pH9.6）稀释至1-10µg/mL，100µL/孔加入酶标板，37℃孵育2小时或4℃过夜‌。

    2.‌洗板与封闭‌

    洗板：弃孔内液体，用1×TBST或PBST洗涤3-5次，每次浸泡1-2分钟，拍干残留液体‌。

    封闭：每孔加入200-350µL封闭液（如5%BSA），37℃孵育1小时，阻断非特异性结合‌。

    3.‌加样与抗原结合‌

    设置空白孔、标准孔和待测样本孔，每孔加100µL标准品或样本‌。

    37℃孵育60-120分钟，确保抗原与包被抗体充分结合‌。

    注意‌：加样时避免气泡，枪头勿触孔壁，10分钟内完成整板加样‌。

    4.‌检测抗体与二抗孵育‌

    洗板后，加入检测抗体（如HRP标记抗体），100µL/孔，37℃孵育45分钟‌。

    再次洗板，加入酶标二抗（如抗鼠IgG-HRP），100µL/孔，37℃孵育30分钟‌。

    5.‌显色与终止‌

    显色：TMB底物A液与B液按1:1混合，100µL/孔，37℃避光孵育10-30分钟‌。

    终止：每孔加100µL1M硫酸终止反应，颜色由蓝变黄‌。

    6.‌读数与数据分析‌

    终止后5分钟内，用酶标仪读取450nm吸光度（OD值）‌。

    数据处理：

    标准曲线拟合：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，用四参数逻辑（4-PL）拟合‌。

    样本浓度计算：根据OD值从标准曲线推算浓度，乘以稀释倍数‌。

    三、关键注意事项

    避免污染‌：使用一次性枪头，不同试剂分开放置，防止交叉污染。

    时间控制‌：各步骤孵育时间需严格遵循说明书，避免非特异性结合。

    重复实验‌：建议设置复孔，取平均值以提高数据可靠性。

    试剂保存‌：未使用的酶标板或试剂需2-8℃密封保存，避免反复冻融。

    四、常见问题解决

    高背景值‌：可能因洗涤不充分或封闭不，需增加洗涤次数或更换封闭液‌。

    标准曲线不佳‌：检查标准品稀释是否准确，或重新配制标准品‌。

    显色异常‌：底物失效或孵育时间过长，需更换新批次底物并优化时间‌。

    通过以上步骤和注意事项，可确保VTNELISA实验的准确性和重复性。若需进一步学习操作细节，可参考以下视频教程：

    注：以上仅供参考，不作为实际数据，实验需严格遵循说明或咨询技术老师。

    ELISA板 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标，本生，您信任的合作伙伴！本生试剂盒