实验秘诀 | 百奥益康心脏解离试剂盒使用攻略及注意事项
2025-11-25 09:14点击次数：10
关键词：百奥益康心脏解离试剂盒（货号BA3327）适用于人、小鼠等哺乳动物心脏组织单细胞悬液制备，适配单细胞测序等实验，该文章以预处理、酶解、细胞收集三步核心流程操作，同时搭配对应的注意事项保障实验效果，具体内容如下：
一、使用方法
1. 实验前准备
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自备仪器与耗材：提前备好水浴锅或杂交炉、水平离心机，以及低吸附枪头、15mL离心管、70μm细胞筛等耗材。
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自备试剂：准备PBS缓冲液、PBS＋5%FBS、RPMI 1640培养基，裂红液等。
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试剂预处理：将试剂盒从-20℃环境取出，在室温下平衡15 - 30分钟，待试剂完全融化后充分混匀，避免因试剂未融均影响解离效果。
2. 组织解离步骤
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组织预处理：选取新鲜的心脏组织，先用灭菌后的PBS缓冲液在冰上清洗至少3次，彻底去除血渍和表面杂质；再用无菌剪刀将清洗后的组织剪切成1 - 2mm³的小块，增大组织与解离液的接触面积，为后续酶解做好准备。
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酶解反应：把剪好的心脏组织小块放入离心管中，加入提前配置好的解离液1中；随后将离心管置于37℃水浴或杂交炉中孵育，过程中可每隔5分钟轻轻颠倒离心管一次，确保组织与解离液充分接触，提升解离效率。解离 20 min 后，加入 300 µL 心脏组织解离液 2，吹打混匀。置于 37℃水浴锅或杂交炉中继续消化5 ~ 10min。根据细胞总量及活性等确定消化停止时间。
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细胞收集：向离心管中加入1640培养基终止消化反应；接着用70μm细胞筛过滤反应液，收集滤液去除未消化完全的组织碎片；之后将滤液放入水平离心机，以4℃、300×g、离心5min，弃去上清液；清洗两次，最后用适量的PBS＋5%FBS重悬细胞，进行质检。
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后续质控：用细胞计数仪检测细胞悬液的细胞活性和结团率，若悬液中红细胞或细胞碎片过多，可按需进行去除操作，具体可参考红细胞裂解液（货号：BA3311）；制备好的单细胞悬液建议尽快用于单细胞测序、细胞培养等后续实验，避免长时间放置导致细胞活性下降。
3. 关键操作技巧
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组织剪切：确保组织块大小均匀，避免过大（导致解离不充分）或过小（增加细胞损伤），建议在冰上操作以减少细胞代谢损伤。
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酶解控制：严格控制孵育温度和时间，温度过高或时间过长易导致细胞活性下降；若组织未充分分散，可补加少量酶溶液并延长孵育5-10分钟，但需避免过度酶解。
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离心参数：离心速度不宜过高（避免细胞破裂），离心后弃上清时需缓慢倾倒，保留少量液体覆盖沉淀，防止细胞丢失。
二、注意事项
1、试剂储存与使用：试剂盒需避免冷冻或反复冻融，未使用的试剂组分需密封后及时放回冰箱，在保质期内使用。酶溶液为关键组分，开启后建议一次性使用，若需分次使用，需分装后-20℃冻存，避免反复冻融超过2次。
2、细胞活性保障：解离过程中尽量缩短样本离体时间，洗涤和离心步骤均在4℃进行，减少细胞暴露于室温的时间。
3、特殊情况调整：若处理的是纤维化程度较高的心脏组织，可适当延长37℃孵育时间，但需密切观察细胞活性，防止过度消化导致细胞活性降低；若组织较嫩，则可按常规20 - 30分钟孵育即可。
4、常见问题处理
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解离效率低：检查组织块大小是否合适，酶溶液是否失效（如未平衡至室温或反复冻融），可适当延长吹打时间或增加酶浓度。
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细胞碎片过多：过滤时确保细胞筛孔径匹配（心肌细胞建议用70μm筛网），离心前充分静置使碎片自然沉降，或增加洗涤次数。
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细胞活性差：排查是否存在酶解过度、离心速度过高或操作时间过长等问题，建议优化步骤并在解离后30分钟内完成后续实验。
三、结果展示
我们对新鲜的小鼠心脏组织进行了实验，结果显示利用心肚组织解离试剂盒解离后获得的细胞悬液质量较好，能满足单细胞转录组测序实验。
通过严格遵循上述攻略和注意事项，可高效获得高活性、高纯度的心脏细胞，保障后续实验结果的可靠性！
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