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同源重组的原理是什么呀 同源臂是什么呀?为什么同源重组的酶可以不用考虑目的片段上有没有呀
汤姆卜丽波
同源重组又称一般性重组。同源重组发生在DNA的同源序列之间,通过配对、链的断裂和再连接,而产生片段交换的过程,是最基本的重组方式,同源臂是指两个DNA片段之间的相似性,主要是因为有同源序列,所以不同考虑目的片段
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问
pcr的原理是什么呀 有可以详细讲解一下的嘛
汤姆卜丽波
在存在DNA模板、引物、dNTPs、适当缓冲液 (Mg2+) 的反应混合物中,在热稳定DNA聚合酶的催化下,对一对寡核苷酸引物所界定的核酸片段进行扩增,这种扩增是以模板DNA与引物之间的变性、退火、延伸三步反应为一个周期,循环进行,使目标DNA片段得以扩增。
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问
各位老瑞氏-吉姆萨染色如果用浸染的方式应该怎么操作呢
汤姆卜丽波
手工步骤是 ①滴加姬姆萨染色液A液(0.5〜0.8ml)于涂片上,并让 染液覆盖整个标本涂片染色1分钟;②将姬姆萨染色液B 液滴加于A液上面(滴加之量为A液的2 ~3倍)以洗耳球吹出 微风使液面产生涟漪状,使两液充分混合,染色3〜10分钟; ③水洗(冲洗时不能先倒掉染液,应以流水冲去,以防有沉渣 沉淀在标本上);④干燥,镜检。你要浸染的话可以取一部分AB液出来,这样不怕污染母液
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问
请问BDNF与IBA-1荧光共定位做不出来的原因是什么?
huarenqiang5
主要考虑是二者的二抗选择不合理导致。建议重新选择二抗试试。
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问
小鼠肺泡灌溪液用瑞氏吉姆萨染色液染一直染不好,染色时间都在试剂说明书基础上做了调整,但细胞胞核颜色总是偏深,有染的好的吗
huarenqiang5
考虑肺泡灌洗液重悬液的细胞浓度过大或有核细胞太过密集或PH偏碱导致。建议不改变浓度可以尝试推片制片,然后分别在低倍镜,高倍镜或者油镜下观察和分类细胞。
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问
ELISA测抗体效价阴性空OD值过高,抗体稀释25600倍之前阴性孔和阳性孔OD值均为2左右
汤姆卜丽波
我之前做ELISA也有这种情况,基本都是洗板子的时候污染了阴性或者空白对照孔,你调整一下流程再试试看
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问
SA-β-gal染色求助
huarenqiang5
SA-β-gal染色不需要在超净台完成,在普通的实验室完成即可。 是的,加了固定液后就可以不要求无菌了。 可以用烘箱孵育染色。
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问
ELISA实验阴性对照组OD值过高是什么原因导致的
huarenqiang5
考虑以下原因及建议:1. 试剂盒组分被污染 建议使用新的试剂盒,按照说明书要求保存试剂盒。2. 试剂配制不正确 建议按照试剂盒说明书步骤,配制相应的试剂溶液。3. 吸液或加液不正确 建议检测移液器和吸头,使用校准好的移液器和正确的移液方法。4. 混用其他试剂盒试剂 建议保证使用试剂盒内完整的一套试剂进行实验,不同品牌及不同批次间的试剂可能存在不匹配
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问
蛋白质电泳的loading buffer中甘油含量会影响分子量结果吗?
汤姆卜丽波
Buffer里边的成分甘油可以加大样品密度,使样品密度大于TAE,从而沉降到点样孔中,防止样品飘出点样孔,一般不会影响结果。
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问
杂志选择(感染性疾病与抗菌药物),是否杂志推荐
汤姆卜丽波
Journal of the International AIDS SocietyJOURNAL OF ANTIMICROBIAL CHEMOTHERAPYJOURNAL OF INFECTIOUS DISEASESJOURNAL OF INFECTIONINTERNATIONAL JOURNAL OF HYGIENE AND ENVIRONMENTAL HEALTH这些都可以试试
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问
医学队列和RCT研究需要对大量的数据进行分析和解读,怎么样快速学习
汤姆卜丽波
先看同邻域的文献使用的研究统计方法,然后上网找课边同自己的数据比较一边实践这样最快
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问
写作中会遇到一些统计方法不合适,需要不断调整
汤姆卜丽波
对啊,写错了统计方法,评审专家会质疑你的实验结果真实性,在统计时就做好分组
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问
求助:如何测定注射器抽吸及注射时的压力值?
汤姆卜丽波
这个连接一个检测仪就可以了,也可以你自己手动做标准曲线
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问
敲低过表达
loveliufudan
选择敲低或过表达目标基因的方法可以从以下几个方面考虑:1. 效率和稳定性:慢病毒系统效率高,可得到稳定敲低或过表达细胞株;siRNA敲低 temporary。2. 负责制:病毒系统可能对宿主细胞有影响,需评估安全性。siRNA影响较小。3. 细胞类型:对难转染细胞,病毒系统转导效率较好。siRNA可用于多种细胞。4. 作用方式:siRNA主要下调mRNA水平,对编码蛋白水平影响有延迟;病毒系统可直
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问
求助!蛋白大小在7kda左右做WB的转膜电压还有时间应该在多少啊
汤姆卜丽波
一般转膜的电流在200mA-400mA之间,转膜时间为30-60分钟。也可以在15-20mA转膜过夜。小片段的可以用250mA。
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问
老师们好,在做临床预测模型的预实验单因素有意义,多因素没意义还需要继续做下去吗
汤姆卜丽波
基本 没必要了,因为你模型做出来可能效果还没有临床指标好用
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问
IOD免疫组化
汤姆卜丽波
没有特别明确的标准,你分离图层后,手动调整,尽量把阳性细胞染色囊括进来就可以了
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问
meta投稿
loveliufudan
这里推荐几本:1. Medicine - 包含各临床医学分支的Meta分析文章,审稿严谨,影响因子2.6。2. BMJ Open - BMJ旗下的开放获取期刊,病例对照研究、Meta分析投稿多。影响因子3.3。3. PLoS ONE - 开放获取期刊,所有领域的Meta分析均可投稿。影响因子3.2。4. Neurology and Therapy - 神经类相关Meta分析专业期刊,影响因子4.3
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泛素化连接方式
loveliufudan
1. 直接通过WB比较确定泛素化方式有以下局限性:(1) WB不能明确区分不同连接方式的泛素化。(2) 泛素化不一定导致靶蛋白降解,连接方式不同对蛋白表达量的影响可能不同。(3) 需要抑制蛋白酶体活性,否则被泛素化标记的蛋白可能已被降解。2. IP确定泛素化方式的优势:(1) 可以分离不同连接方式的泛素化蛋白。(2) 明确鉴定泛素化部位和类型。(3) 不依赖于蛋白降解,直接检测标记状态。(4) 结
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蛋白纯化buffer 变浑浊求助
汤姆卜丽波
肯定有影响的,你纯化出来的蛋白跑胶看看大小对不对,有没有杂带,浑浊的就不要用了,下次注意操作时避免污染
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