实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问如何根据CT值计算分析实验结果？

此用户已注销

内参大概16-22之间吧，太靠后也不好；目的基因，最好30之前，但有的情况，起峰会很晚，最好做无模版对照，即NC对照，NC理论上不会起峰，或在NC之前5-6个起峰的数值可用；

4 回答3600 围观

问为什么曝光出来目的条带总是黑黑的一团，而不是一个小条带？

benjimmy33108

建议上述liona_lin的建议：降低上样量，降低一抗浓度以及调整曝光时间

5 回答4067 围观

问有人做过免疫组化，一抗用NF-KB么？求阳性结果图。

伊一1

可以查文献找图，有的公司网站上有对应抗体的图，还有就是找阳性对照组织做，最后建议你弄个阴性对照，就是用PBS代替一抗，这样更利于对比

3 回答2247 围观

问western相关试剂怎么选？

我是金博士

BSA 亚科的我们用3%封闭液我们一般用3-5次，4度保存是的用undefined的洗涤缓冲液，这几个蛋白我们做的多了，easy

1 回答1735 围观

问逆转引物的选择问题

parashorea

如果你的逆转录的目的是QPCR的话，选择同时含有oligo T 和Random primier双引物，如果你的目的是克隆基因的话，选择oligo dT.

2 回答1222 围观

问目的基因片段电泳鉴定无结果是为什么？

hl16010921

1.先对比引物序列，看序列是否真的评分很高（文献的也要自己重新查，文献审稿时引物错误是没人挑的）2.引物质量很重要，PCR不出结果，可以不付帐。换一家试试。有的公司引物合成时好时坏。3.引物的保存不当。4.PCR体系中有强的抑制Taq的物质（抽提污染或水的质量不高）5.是否有引物二聚体？有的话证明PCR还在进行，但条件不好。如果没有证明PCR没进行。6.dNTP降解也有可能。7。ULYSSEESW

2 回答2411 围观

问用乙醇沉淀质粒时只能看到一点点沉淀是什么原因？

yeselanshan

没有盐，还有就是加乙醇后一定得混匀。

2 回答3687 围观

问RT-PCR 特异性，实验组和阳性及阴性对照组最后都出现了目的条带是为什么？

hl16010921

1.人或哺乳动物的保守基因可能是操作者带来的污染。（这点很容易被忽视，尤其是老手）2.多样品时加样失误，用排管或板时有时出现。3.试剂或水的污染尤其是公共试剂。4.电泳点样或上样时混入。5.误将引物二聚体当做目的带了（目的带低于100bp时或目的带没出，无marker时可能性大）6.都换新的重做。同时PCR时一定带手套，做实验前拖地，清洁台面，把头发，胡子包一下，不要有人员走来走去。

3 回答1623 围观

问关于质粒筛选中的抗生素使用

赤脚草医

可以的，两者都是氨基糖苷类抗生素，都是抑制蛋白合成达到杀细胞作用，我也是用的neomycin抗性质粒，G418筛选，付个质粒的详细文件你看下。。。。。怎么传不了PDF文件？

2 回答2857 围观

问p 一段 579bp 的基因，p 了 n 次都没成功是为什么？

benjimmy33108

如果就是第二个碱基一个有多态性，那么一般不会有多大影响的，建议你换一个聚合酶试一试，我P过很基因，有些基因就是有一些酶怎么设置都P不出来，结果其他几种可能就能P出来，或者你可以拿最普通的2X预混的先摸一下退货温度之后，看看能否P出来，再进行高保真的PCR.

2 回答2125 围观

问粪便DNA做荧光定量PCR是否一定需要标准菌株？

helen_gu

做16s吗？可能引物设计比较困难，一般特异性不够，可能会扩出其他的菌

3 回答1417 围观

问提取多少核酸够用？

ULYSSEESWB

做预实验啊。。。提取rna至少需要6孔板级别的，至少2孔以上吧，细胞瓶绝对是够了

1 回答973 围观

问如何动态观察细胞的生长情况

1 回答1766 围观

问荧光定量 PCR 扩增曲线呈现锯齿状是什么原因？

elite_xy

锯齿，应该是一上一下吧，好诡异的曲线，好困惑的问题，从没见过，建议全套realtime试剂盒全换，或者用现有的试剂盒去另一台机器试试

1 回答1123 围观

问蛋白样本能保存多久？

我是金博士

可以的，已经变性了，所以可以放置很长时间，不过要注意一下标记，长时间保存，保存的记号容易变淡，这点注意一下就好了，还会实验条件之类的。

1 回答7411 围观

问曝光图上可以看到非特异性吸附很多，MARKER 也出现了条带，请问怎样可以改变该现象？

我是金博士

一抗用1:1000，二抗用1:5000试试。

1 回答3111 围观

问求问 2Xlaemmli sample buffer 怎么配制？

liona_lin

1. Sample Buffer, Laemmli 2× Concentrate:Solution contains 4% SDS, 20% glycerol, 10% 2-mercaptoethanol, 0.004% bromphenol blue and 0.125 M Tris HCl, pH approx. 6.8.2. SDS gel-loading buffer (2X) 100 m

1 回答1165 围观

问SD 大鼠的心肌标本，一抗二抗如何选择？

我是金博士

一抗选择能与你的种属来源起交叉反应的二抗选择：如果一抗来源是小鼠，二抗选择什么抗小鼠，以此类推。

1 回答1626 围观

问冰冻切片免疫双染的背景问题

1859 围观

问家兔颈总动脉如何提取 RNA

liona_lin

您可以尝试用研钵加液氮研磨法提取

1 回答1785 围观

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