实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问Co-IP时，Input的带型不够亮，怎么解决？

天一湖医者

Co-IP时，Input的带型不够亮，可以瞬转通过表达解决。

3 回答456 围观

问请问Co-Ip如何选择合适的Input对照和同型对照？有什么要求和原则吗？

府宅

Co-IP使用Input阳性对照即可，Input即实验使用的细胞裂解液

3 回答517 围观

问脑炎病人如何做到准确用药

dxy_gwrp7ndq

脑炎患者用药要根据具体的类型，病因，症状而定。病毒性脑炎要进行抗病毒治疗，化脓性脑炎要进行抗生素治疗，抗生素可以根据抗结核治疗。患者出现脑水肿，要使用药物来降低颅内压，控制病情。

2 回答400 围观

问转基因植株用基因枪时氦气压力应该控制在什么范围，十次里面四次直接失败

dxy_gwrp7ndq

氦压表指针的示数高于可裂膜压力200psi(＝1．379mpa)

1 回答450 围观

问关于PCR的相关知识提问

bamboopiggy

就是把你要克隆的片段两头各取15个碱基，加上酶切位点和三个保护碱基就好。

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问原代细胞培养的相关注意事项

未来9

1)原代培养的分离细胞在初次接触体外环境时，它们之间会互相影响，在这些细胞之间能产生一些促生长的活性物质，使细胞彼此互相促进存活和生长。如果接种的细胞密度过低，细胞之间的促生长作用很小，也很难使细胞适应从体内的组织环境到被分散后进入独立生存环境的变化过程。如果接种的细胞密度过大，会导致营养物质供应不足，代谢废物积累较快需要经常换液和传代。　　2）适当增大原代培养接种的细胞密度，给培养的细胞提供更

5 回答786 围观

问WB胶片背景很脏，有什么解决方法？

bamboopiggy

可以试试把tween的浓度改为千分之一点五

2 回答464 围观

问流式检测时荧光值是负的是怎么回事？

dxy_gwrp7ndq

这里的负值，针对的是信号分布，并非指表达强度是负数。

3 回答2892 围观

问核酸斑点杂交中杂交液中探针的浓度多少合适

bamboopiggy

这个要看你具体用什么探针，买的时候，公司应该都有推荐浓度，一般0.5uM

3 回答512 围观

问请问用有角度的转子对密度梯度离心有什么影响？

bamboopiggy

个人感觉是都可以用，只要你按照机器的参数调好，其实有角度的转子比水平的转子我感觉好用。

3 回答889 围观

问免疫荧光怎么看共定位呢，merge之后有跟DAPI交叠的，也有没有与DAPI交叠的，那这个目的蛋白是表达在哪里呢？

xuchanglu88

其实你看到的文献中大部分是在表明这个蛋白是表达在细胞核，但是具体到表达在细胞核的哪个部位，那则需要更高维度和分辨率的方法去回答。在很多时候，你能够看到你的目的蛋白merge之后与DAPI的交叠就在一定程度上说明目的蛋白表达在细胞核，但要是再探究是核里的哪个位置，那就需要更高分辨率的技术手段了。

2 回答5548 围观

问有没有大神做神经元内质网应激通路的呀？求抗体推荐🙏 🙏 🙏 🙏

bamboopiggy

去cst官网看看，有专门的ER stress antibody的kit卖，里面有内质网应激的特异性抗体

1 回答177 围观

问组织块培养皮肤成纤维细胞

bamboopiggy

尽量把组织切小块，等爬出的细胞在皿底融合即可。

3 回答683 围观

问q-PCR 有的组织样β-actin有双峰，有的组织又没有这是为什么鸭？求解答

dxy_gwrp7ndq

可能是beta-actin基因特异性不强，荧光定量PCR对引物的要求很高，就导致双峰

4 回答723 围观

问酶切反应混合物的体积是否对酶切效果有影响？为什么？

府宅

有影响，加入反应的酶体积不超过反应总体积的1/10，避免限制酶活性受到甘油的影响。大多数限制酶贮存在50％甘油溶液中，以避免在-20℃条件下结冰。

4 回答3217 围观

问请问有IBS-SSS量表吗？

天一湖医者

医学量表、计算器 / 消化 / IBS病情严重程度调查表（IBS-SSS）

2 回答3267 围观

问怎样查找miRNA与蛋白的结合位点

xuchanglu88

这个可以通过生物信息学方法和实验方法，对于生物信息学方法，可以选择TargetScan和miRnada；而实验方法则可以通过免疫沉淀、干扰你的miRNA后检测基因的表达变化等。个人建议先进行上面提到的或者你自己查到的一些软件进行预测，然后再结合实验手段进行验证。

4 回答1041 围观

问“ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列”的原因是什么？

bamboopiggy

嘌呤或嘧啶成串会在GC富集区域引发错配。

3 回答612 围观

问菌液OD600 在0.6-0.8之间表明细菌处于log 生长期？

Topmicro

通常所说的菌液OD600=0.6-0.8是在紫外分光光度计使用10mm光程的时候测定的，如果使用酶标仪测定的话注意校正换算。

3 回答15368 围观

问PCR引物特异性不够好，又没什么好的方法来避免呢？

黑布林的大狸子

看不见电泳图，猜一下情况吧1.如果电泳图上有你想要的条带，直接切取相应条带，做琼脂糖凝胶回收就好了（天根有卖），这个片段只会有你引物的两个结合位点，然后用作模板再扩增就行了。2.如果没有目标条带，可以尝试提高退火温度，也可以考虑换引物ps.如果题主只是想做检测的话，加条探针就好了。

2 回答1003 围观

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