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问
请问,我提出来的RNA浓度很低只有18ng/ul,od值也是1.7几,是不是提出来的是蛋白质,不是RNA,有谁出现这种情况吗?
bamboopiggy
你看你读的od值是什么数值的?260/230还是260/280?
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问
qpcr用水代替模板上机,结果仍然有曲线,是引物的问题还是被污染了?
bamboopiggy
可能是引物二聚体,也可能是水被污染了,这个要更换其中一个进行判断
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问
为什么转化涂板后第二天菌落长的特别多,老师说是不对的?
bamboopiggy
你是质粒转化,还是连接产物转化?如果是质粒,是可以的,如果是连接产物,那一般是假的
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问
PCR溶解曲线虽然为单峰,但峰看起来有点宽说明什么?
bamboopiggy
说明你的 引物不特异,有两个size差不多大小的产物产生
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问
荧光定量PCR的基线,是怎么确定的呢?
bamboopiggy
基线就是一开始基本没有读值的那些线啊,你说的应该是读CT值得那个threshold 线吧,那个就是斜率最大得地方,的一条线,现在基本由机器自己去判断了
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问
我做PCR实验,有关引物的问题?
bamboopiggy
如果不加模板也能扩增出目的条带,就是说明引物或者你加进去的东西中的某一样污染了
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问
想问一下,在wb时,配制5%的脱脂奶粉,有的用pbst稀释有的人用tbst稀释,两个缓冲液有什么区别吗?
bamboopiggy
都是缓冲液,问题不大,我 喜欢用pbst,因为不需要调ph值,tbst是需要调ph值得,但是有人说tbst对磷酸化得蛋白好。
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问
wb实验跑完结果还不错,但是发现中间有个泳道没有加样,我出图的时候可以把中间那个剪切掉吗?这算不算做假图呢?
秋秋欣欣
可以把中间泳道剪掉,重新显影。
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问
自己制胶跑出来经常歪歪扭扭,怎样才能把胶跑的非常漂亮?
bamboopiggy
不能急,一定要把胶混匀,且彻底凝固后,再用
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问
为什么提高大分子量蛋白的转移的时候,小分子量蛋白会丢失一些哪?什么原因?
bamboopiggy
小分子量的蛋白跑的比大分子量的快,如果为了得到更多得大分子量蛋白,会是小分子量得蛋白穿过膜,丢失了
3 回答
535 围观
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问
WB实验目的蛋白空白,但是marker很明显,为什么?
bamboopiggy
marker明显至少转膜是转过去的了,会不会是条带位置不对?
3 回答
2205 围观
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问
跑wb出现这种情况,是怎么回事?没有条带,全是黑点点……
秋秋欣欣
是不是转膜的时候,膜活化之前被污染了。
3 回答
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问
SYBR GREEN I染料需要严格避光吗?
bamboopiggy
不用那么严格,就是加好板子以后,如果不能立刻上机,最好避光保存。加板子的时候不用
6 回答
3369 围观
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问
荧光定量qPCR的重复性好吗?
bamboopiggy
复孔是需要的,如果一个板跑不开内参和目的基因,可以分两个板跑,但是要求时间间隔不能超过一周,并且必须用同一台机器
6 回答
873 围观
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问
lncRNA使用shRNA敲低后使用什么方法回补效果比较好?
秋秋欣欣
pcDNA过表达就行,普通的也不会有影响
2 回答
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问
质粒转染中,在不对细胞活率影响下,平均单个细胞能承受多少拷贝质粒,或多少质量的质粒?
汤姆卜丽波
一般单个细胞根据质粒的大小来看,转染效率比较好的话可以接受2-3个,差不多的话基本一对一
2 回答
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问
A549细胞到底是如何形态
bamboopiggy
人非小细胞肺癌的细胞,是由D·J·Griad通过肺癌组织移植培养建系,源自于一位58岁白人男性
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问
请教Proteome profiler array是什么分析
汤姆卜丽波
Proteome Profiler即血管生成蛋白芯片抗体,芯片为同时检测单个样品中多个分析物的相对水平提供了一种快速、灵敏而又经济的工具。这种芯片的使用不需要特殊的仪器,也不需要进行多个免疫沉淀或者Western blot实验。每个芯片在设计时都采用精心挑选的捕获抗体,并在硝酸纤维素膜上重复点样两次。这些膜与实验样品以及包含生物素化检测抗体混合物共同孵育,随后加入辣根过氧化物酶(HRP)偶联的链亲
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问
ros荧光探针
汤姆卜丽波
根据你的荧光,重新设置一下激发光长度
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问
WB蛋白孵育
汤姆卜丽波
试着缩短一点一抗的孵育时间,多洗几遍看会不会好一点
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