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实验问答

23,938,853 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问质谱和蛋白质组学的数据分析应用

huarenqiang5

可以利用双杂交技术和质谱法来研究蛋白质相互作用网络的构建。

3 回答642 围观

问中药配方颗粒溶解过滤过可以直接开展细胞水平的研究吗？

龙大人驾到

中药配方颗粒溶解过滤后的液体可以用于细胞水平的研究，但需要注意以下几个方面：1. 细胞毒性评估：中药配方颗粒中可能存在活性成分或化合物，对细胞有潜在的毒性。在进行细胞水平的研究之前，需要对中药配方颗粒溶液进行细胞毒性评估，确保其对目标细胞不会产生明显的毒性影响。2. 有效成分的验证：中药配方颗粒溶液中可能含有多种化合物，其中是否存在对目标细胞具有生物活性的有效成分需要进行验证。可以通过分离、纯化和

4 回答568 围观

问请问外泌体提取需要无菌环境吗

sswei

外泌体提取过程是需要无菌环境的。

3 回答800 围观

问我是用LPS诱导树突细胞成熟，结果细胞死亡，查了有不同的说明的，是不是一定要suitable for cell culture?

huarenqiang5

是的，一般都需要suitable for cell culture。

4 回答516 围观

问qPCR实验内参的值都比目的基因的值大，这正常吗。

龙大人驾到

在 qPCR 实验中，内参基因（也称为参考基因或稳定表达基因）应该具有相对稳定的表达水平，不受实验条件或处理的影响。它们通常用作标准化因子，用于对目的基因的表达进行相对定量。一般情况下，内参基因的表达值应该与目的基因的表达值接近。如果在 qPCR 实验中发现内参基因的值普遍比目的基因的值大，这可能是由于以下原因之一：1. 选择不合适的内参基因：内参基因的选择是关键步骤，应该选择具有稳定表达水平的基

5 回答14305 围观

问组织蛋白酶和趋化因子共同孵育看结果，可以做免疫共沉淀来验证吗？

sswei

免疫共沉淀能看出组织蛋白酶对趋化因子的切割后产生更小分子条带的反应

5 回答259 围观

问考马斯亮蓝（兰）R-350是什么呀，怎么和R250、G250区别呀？实验时怎么选择，原理是什么

huarenqiang5

考马斯蓝R-250和G-250染料是考马斯染料的两种最常见的化学形式，是二磺化的三苯基甲烷化合物。R-250（红色）缺少以G-250（绿色）形式存在的两个甲基。“250”最初表示染料的纯度。考马斯蓝染色原理：不同的颜色是染料分子不同带电状态的结果。当pH值小于0时，考马斯蓝G250染料会腐蚀所有带正电荷的三个氮原子，颜色为红色最大吸收波长为465nm。当pH值约为1时，染料的总电荷为+1（2-磺酸

6 回答1249 围观

问请问人角膜内皮细胞系B4G12和21T有什么区别么？这两种细胞系建模内皮间质转化模型或衰老模型会有区别么？

龙大人驾到

人角膜内皮细胞系B4G12和21T是两种不同的细胞系，它们在细胞形态、生长特性、分子表达等方面存在一定的差异。具体来说，B4G12细胞系是一种来源于人角膜内皮的细胞系，主要用于研究角膜内皮细胞在生长、分化、代谢等方面的生物学特性。而21T细胞系则是一种来源于人角膜内皮的转化细胞系，具有更强的增殖能力和更弱的细胞一致性。当建模内皮间质转化模型或者衰老模型时，这两种细胞系的差异可能会对模型产生影响。例

3 回答620 围观

问大于220kd的蛋白该怎么设置转膜条件，还有跑胶时怎样可以使杂带减少，哪位帮忙解决一下，谢谢；？

龙大人驾到

对于大于220 kDa的蛋白，可以考虑以下转膜条件：1. 延长转膜时间：由于大分子量蛋白需要更长的时间才能转移到膜上，因此可以考虑延长转膜时间，例如将转膜时间延长至过夜。2. 降低电流密度：降低电流密度可以减少转膜时蛋白的聚集，从而提高转膜效率。建议使用电流密度为0.8 mA/cm2左右的条件。3. 使用更大的孔径滤纸：使用更大孔径的滤纸可以减少蛋白的滞留，提高转膜效率。对于跑胶时如何减少杂带，可

5 回答1808 围观

问如果筛选出的差异代谢物很少，该怎么办？

龙大人驾到

当利用常用的阈值筛选差异代谢物时，如果筛选到的差异代谢物很少，可能有以下几个原因：1. 样本数量不足或质量差：样本数量不足或样本质量差可能导致差异代谢物的筛选结果不够准确和可靠。2. 表达水平差异较小：如果筛选的阈值较高，可能会导致表达水平差异较小的代谢物无法被筛选出来。3. 生物学变异：生物学变异可能导致差异代谢物的筛选结果不够准确和可靠。为了解决这些问题，可以考虑以下几个方法：1. 增加样本数

5 回答2026 围观

问chip实验后面进行qPCR引物设计

huarenqiang5

chip实验后qpcr引物设计和普通qpcr引物设计一样，都需要引物的特异性高，并且要保证扩增效率高，才能确保模板以指数级别扩增。

4 回答1562 围观

问有没有病理技术这一块的交流群呀，比如HE染色的问题，脱水不佳问题，切片问题，免疫组化，分子病理等，想要学习

skyye

丁香实验板块有很多包括病理技术染色等类似的实验交流，可以搜索试试，或者找病理科老师或实验室做过该类实验的师兄师姐请教的

4 回答443 围观

问用PBS重悬细胞300g离心10min，重复两次，第一次离心细胞沉淀还多，第二次离心没有看到细胞沉淀请问这是怎么回事

huarenqiang5

考虑可能是没有离下来或是你弃上清的时候将细胞团块不小心吸走了。

3 回答1249 围观

问先加入LPS诱导降低细胞活力百分之50后，如果再加入一种提高细胞活力的药物，比如银杏单体，细胞活力还可以提高吗？

土井挞克树

可以的，但是需要高浓度的银杏单体

4 回答609 围观

问通路抑制剂阻断通路后（比如Nrf2),还可以被药物(比如银杏单体）再次激活吗？细胞实验加药顺序应该如何？

土井挞克树

可以被再次激活，但是需要更高浓度的激活物

4 回答730 围观

问c57小鼠，8周龄，结肠炎模型，需要定制高色氨酸饲料，饲料中添加色氨酸的量一般为多少啊？在原基础上添

huarenqiang5

饲料中在原基础上添加色氨酸为0.05%左右。

4 回答567 围观

问趋化因子CCL20和CTSD/CTSB怎么共同孵育，怎么继续做Western实验

龙大人驾到

想要在硬骨鱼中重复一篇文献中的实验，这篇文献中的实验主要是研究组织蛋白酶B和D对趋化因子CCL20的切割作用。下面是一些可能有用的步骤：共同孵育：共同孵育是将两种蛋白质一起孵育的实验步骤，目的是研究它们之间的相互作用。在共同孵育前，需要确定孵育的最佳条件，如温度、时间和缓冲液等。对于硬骨鱼中的组织蛋白酶和CCL20，可以先尝试在不同的缓冲液中进行共同孵育，例如PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液等

3 回答519 围观

问请教用加尾法进行microrna的反转录和qpcr

从头酷到矫

你好.可以分享一下u6的引物序列嘛

2 回答530 围观

问求助 |给细胞转染了miR mimic，目标蛋白反而升高了。

yqyq28

你好！请问解决了吗，我也遇到了这种情况！！

3 回答440 围观

问miRNA加尾法进校qPCR的通用引物序列，请问哪位大佬能提供一下

秋秋欣欣

我用的U6引物序列是① U6snRNA F Primer 5‘ATTGGAACGATACAGAGAAGATT② U6snRNA R Primer 5’ GGAACGCTTCACGAATTTG

3 回答1343 围观

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