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科研学霸天团,48小时有问必答
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条带模糊,我应该提高退火温度还是降低退火温度呀?我这次设置的温度是58℃ 这对引物的tm较小值为53.53
高山云初
电泳条带太浅或没有应该降低退火温度。
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问
质粒转染和提取的全步骤
小小翻车鱼
以下是质粒转染和提取的全步骤:质粒转染步骤:1. 质粒DNA制备:首先从含有目标基因的质粒中提取质粒DNA。提取过程包括细胞裂解、质粒与染色体DNA分离、乙醇沉淀等步骤。2. 转染试剂和培养基的准备:选择合适的转染试剂,如脂质体转染试剂、电穿孔转染试剂等。准备好宿主细胞,如细菌、酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞,并将细胞接种到合适的培养基中。3. 转染操作:将质粒DNA与转染试剂混合,形成转染复合物。
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问
纯化好的蛋白放-40℃冰箱一段时间后,拿出解冻,发现有白色絮状沉淀物,请问这是什么原因导致的,蛋白还能用吗,能用要怎么处理沉淀?
小小翻车鱼
白色絮状沉淀物可能是由于PBS缓冲液中的盐类结晶所致。这种情况下,蛋白质可能仍然可以使用,但需要进行一些处理。首先,将蛋白质样品离心,去除上清液中的沉淀物。然后,可以使用滤器或者离心管等工具将蛋白质样品过滤或离心,去除残留的盐类结晶。最后,可以重新调制PBS缓冲液,并将蛋白质样品溶解在其中。需要注意的是,如果蛋白质样品的结晶较为严重,或者出现了其他异常情况,建议重新制备蛋白质样品。此外,在保存蛋白
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问
SiRNA转染iMAX的作用和原理?
sswei
siRNA的抑制作用是通过其与AGO蛋白组装成的RNA诱导沉默复合体(RISC)发挥的。一条链被降解,另一条链则与靶基因的mRNA互补配对,使其被切割降解,从而达到治疗相关疾病的目的。与传统的基因治疗相比,siRNA具有高度特异性、快速、可逆性等优点,可以应用于各种真核生物的基因功能研究,药靶发现及药物筛选中广泛应用。例如siRNA靶向恶性肿瘤的基因可以通过局部或系统性给药来治疗肿瘤,病毒感染和遗
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问
求助大神:大家有用过促进细胞有丝分裂的试剂吗?
huarenqiang5
是的,这些生长因子可以促进细胞分裂。
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问
Elisa实验做完,吸光度太高,一般是什么原因呢?
dxy_xextz7w2
有可能是试剂和样品没有混合均匀
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问
求问想做角膜内皮的内皮间质转化,用角膜内皮细胞系可以么?还是必须要用原代细胞?
高山云初
尽量用原代,其他这些细胞来源仍处在实验阶段
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问
测定脂肪细胞中的甘油三酯应该怎么测?我看还需要测蛋白浓度校正,那么一个孔的细胞如何测了甘油三酯,又测蛋白浓度呢?
小小翻车鱼
测定脂肪细胞中的甘油三酯可以使用一种称为甘油三酯试剂盒的化学试剂盒。这种试剂盒通常基于酶促反应,可以测量样品中甘油三酯的含量。对于蛋白浓度校正,可以在同一样品中测量蛋白质的含量。常见的方法是使用BCA或Bradford等蛋白质测定试剂盒,根据试剂盒的说明进行操作。然后,将甘油三酯的浓度与蛋白质的浓度进行校正,以得到准确的甘油三酯含量。对于一个孔的细胞样品,您可以使用以下步骤来同时测量甘油三酯和蛋白
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问
测氨氮磷 的工作曲线 可不可以用别人的 会不会有误差 什么导致的
土井挞克树
如果是同一批样品你是可以用别人的曲线
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问
钼酸铵测总磷 过硫酸钾消解的步骤是一定要有吗
高山云初
是的,测定总磷必须消解,因为一部分磷是以有机物形式存在的,钼酸铵分光光度法测得的都是溶解态的磷,只有通过消解才可以让有机物中的磷以溶解态形式存在
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问
废水里 光合细菌投加量多少为宜,藻类投加量多少为宜
huarenqiang5
投加100ppm的光合细菌。藻类的除去投加量为0.4-0.8mg/L。
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问
按1比3加入磷酸缓冲液 是加入1克样品添加3毫升酸缓冲液算吗
土井挞克树
是的1:3就是1g:3ml的量
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问
岛津的nsmol试剂盒对单抗进行酶解并富集后,可以直接进质谱吗?
土井挞克树
可以直接进质谱的,这个试剂盒效果不错
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问
检测油脂微囊粉中的脂肪酸是参照国家标准GB5009.168-2016中的酸水解法嘛?
土井挞克树
是的,这些都是参照酸水解法的国家标准的
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问
微绿球藻 通常用什么培养基培养
土井挞克树
我们实验室用的bg11,效果很不错
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问
保存的菌液还有蛋白是一定要放-80℃冰箱吗,放在-20℃或者-40℃冰箱不可以吗?
土井挞克树
短期内也可以放在-20摄氏度,长期不可以
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问
菌液pcr条带长度计算
土井挞克树
按碱基对的数目计算,多少bp就是多少长度
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问
测定所分离菌株的耐酸性时,培养基ph如何调节,调节ph的试剂如何配置,另外,采用平板涂布法分离菌株时,涂布棒很难冷却怎么办?
huarenqiang5
可加入4%氢氧化钠溶液进行调节。
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问
CBA实验步骤细节方面的问题
土井挞克树
一个磁珠包被一个抗体,否则容易混淆
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问
请问这个基因特异性敲除是如何做到的
feixue7758527w
基因敲除一般都是诱导基因敲除或者同源重组敲除,这部分内容可以请公司进行敲除,否则实验太复杂,太耽误时间。
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