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问
如果上样量超载,要用什么方法来增加上样量?
balalaLy
换厚的10孔梳子,孔径比较大,可以加到50ul左右
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问
如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白,操作需要注意什么?
NatureBios
提蛋白根据蛋白表达位置可以选择对应的裂解液,如提胞浆蛋白的裂解液,提膜蛋白裂解或全细胞裂解液,操作上常规的注意事项那就是冰浴裂解,蛋白酶抑制剂,PMSF(磷酸化蛋白检测时磷酸酶抑制剂cocktail)等
4 回答
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问
同一蛋白样品能同时进行两种因子的WB检测吗?
juyue2010
可以,在孵育1抗时剪膜,不过要注意两个蛋白要分子量不能接近
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问
做WB时我的目的带很弱,怎么加强?
NatureBios
只要有目的蛋白印迹,后面的都很好办,我们可以在上样量,一二抗的浓度,显影液灵敏度,曝光时间等几个方面着手
5 回答
229 围观
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问
做WB有什么方法可以提高上样量?
NatureBios
给样本浓缩,可以用IP富集一下目的蛋白,低电压,让点样孔里面的样本往下跑一跑,再加一些样本等
4 回答
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问
为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白?
申东熙老伯
是通过western检测到没有目标蛋白吗?可能是表达量低没检测到
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249 围观
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问
我的细胞提取液有的有沉淀,有的很清亮,为什么呢?
此用户已注销
a) 有沉淀可能因为你的蛋白没有变性完全,可以适当提高SDS 浓度,同时将样品煮沸时间延长;b) 也不排除你的抗原浓度过高,这时再加入适量上样缓冲液即可
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问
国产全自动荧光免疫测试仪稳定性如果?
NatureBios
市售的仪器,不同品牌的可能会有差别,稳定性应该都还是可以用的,我们国内各领域也都发展的很快的,
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问
出血多少需要补充凝血纤维蛋白原了?
此用户已注销
多数临床医生在活动性出血时并不行纤维蛋白原水平监测,或认为需治疗的阈值水平为1g/L。此外,只有在纤维蛋白原<1g/L时,凝血酶原时间及活化部分凝血酶原时间等凝血指标才会受影响。
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问
內源性coip最少细胞用量与最大细胞用量,细胞量太大会不会造成非特异性结合
NatureBios
CO-IP的样本量会根据蛋白丰度有些偏差,做wb,通常细胞数量在10的六次方以上,定量后每个泳道20ug样本,非特异情形可以先用磁珠protein A处理下样本,再开始往下做
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721 围观
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问
蛋白免疫印迹常用的标签有哪些?如何选择?
NatureBios
标签有HIS HA FLAG GST GFP RFP mCherry等会在蛋白表达时插入到表达体系中,Western blot常用的内参有actin GAPDH Tubulin,针对样本核浆膜提取的样本,也有相应的蛋白做内参
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问
用亚硝酸钠—硝酸铝—氢氧化钠测总黄酮,加到96孔板前离心分离络合物,会不会影响实验结果
此用户已注销
用亚硝酸钠—硝酸铝—氢氧化钠测总黄酮,加到96孔板前离心分离络合物,不会影响实验结果
4 回答
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问
各位大神,阳性质控被我做出单阳,另有一个标本翘尾了,请问什么原因?其他结果能发吗?😖😖😖
balalaLy
质控出现问题肯定得重新复核了。可能阳性质控样品出现问题了。
4 回答
341 围观
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问
大肠菌群检样三个稀释度检测结果都是阴性时,MPN怎样表示
汤姆卜丽波
当检索表内三个稀释度检测结果均为阴性时, 应按小于 3 报告, MPN 这样更能反映实际情况。
3 回答
1575 围观
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问
独立样本T检验,勾选自助抽样可以增加样本量么?
汤姆卜丽波
自助抽样本质上就是把你的小样本通过随机抽取又放回的模式增加样本量然后平均数据的。
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664 围观
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问
关于自噬的疑问
汤姆卜丽波
一般来说药物的影响比较单一,如果本身具有促进自噬作用那么统一倾向于促进作用
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433 围观
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问
军团菌培养菌落大小不一致问题。
汤姆卜丽波
可以试着调整下基础菌的浓度,划线法两区域之间只搭着一条就可以了,
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225 围观
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问
求问Sf9细胞表达
汤姆卜丽波
可能是你的荧光蛋白选择有问题,也可能是合成时它与目的蛋白的位置导致目的蛋白被折叠不表达或者被切割
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1263 围观
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问
CRISPR cas9 敲除STING基因没有一个是成功的 基因测序并没有突变 是什么原因啊
汤姆卜丽波
可能是等位敲除了同样的碱基。碱基变化数目为3的倍数时,因无法造成移码突变,敲除可能会失败。需要碱基变化数目不为3的倍数,才可算成功
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1336 围观
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问
试剂盒中的巯基乙醇可以换成别的试剂吗?巯基乙醇实在是太难闻了,😭😭,如果可以,可以换成哪些试剂呢
balalaLy
试剂盒的试剂就尽量不要换了,如果不是试剂盒还可以选没有气味的trizol。不过试剂没有气味也不一定无毒,有气味还能警示一下。可以拿到安全柜里边操作。
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772 围观
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