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科研问题
土井挞克树
需要学习统计学,这个很有用,是敲门砖。
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问
求助:细胞自噬MDC染色,激光共聚焦可以拍吗?应该用什么波长呢?
土井挞克树
可以拍,尝试选择415nm的波长。
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问
中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、293F细胞、293T细胞之间的区别?
土井挞克树
293T人胚肾细胞:人胚肾细胞293细胞插入SV40 T-抗原基因后产生的高转染效率的衍生株称为293T。293F人胚肾细胞:该细胞稳定表达SV40大T抗原,并且促进最适病毒产物的产生。293FT细胞能制造高滴度的慢病毒。CHO:中国仓鼠卵巢细胞。
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问
我的qpcr扩增曲线有的居然是从零点开始扩增的…请教一下这是咋回事呢
土井挞克树
1. 加样误差导致:定期校准移液器;同时可先配制除模板以外的其他试剂的预混液,然后进行分装再加入模板,其次加大模板上样体积,以上均可降低移液误差的影响。2. 模板浓度越低,重复性越差。建议提高模板量,使Ct值在15-30之间。
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问
实验时,pcr条带不在同一条直线上,是模板不纯还是特异性问题?
dxyc42u
可能条件有关,胶是怎么配的,maker是多大,目标片段多大,电泳液浓度,电泳电压和时间,有没有其他异常情况。
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问
Taqman探针检测
dxyc42u
ct值不光与灵敏度有关,还与其他因素有关
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问
请问模板的量大概应该控制在多少?
juyue2010
反转录后,取一部分cDNA稀释10倍,加2ul到pcr体系
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问
为什么细胞内DNA复制的引物是RNA?PCR的引物是DNA?
dxyc42u
我认为可能同RNA具有催化、遗传的双重性质有关
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问
PCR技术中加入的“引物”是什么?有什么作用?引物会在PCR仪中复制吗?
dxyc42u
引物是PCR过程中与模板DNA部分序列互补,并能引导模板DNA互补DNA链合成的一种脱氧核苷酸寡聚体,其3'端必须具有游离的-OH.它按预先设计用化学方法合成,其长短与PCR过程的特异性高低密切相关.一般来说,引物长的,特异性高.
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问
哪些种类的反应管和盖子适合定量PCR 实验使用?有何需要注意的地方?
dxyc42u
就买专门用来做pcr的管子即可,没啥特别要求,最后盖盖子带上薄膜手套盖
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问
PCR实验室出现污染怎么处理?
juyue2010
全面的紫外照射,过氧化氢消杀,还有核酸消除试剂处理
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问
PCR实验过程中易发生污染的原因有哪些?
dxyc42u
实验过程性枪头这些都要求无酶的,不要怕浪费枪头,严格执行无酶操作
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问
感觉使用排枪加样会浪费很多样品或者试剂,大家是怎样解决这个问题的呢?
juyue2010
先配置比你总共需要的管数多2-3个样的mix,分装到8联排管管中,最后用排枪加。
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问
请问在加qPCR样的时候,反向吸排(先按到移液枪第二档再在加样时每次加到第一档)会更精确吗?有试过的小伙伴吗?
土井挞克树
会更加准确,反向吸排可以减少误差。
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问
pcr快速核酸和普通核酸检测区别
huarenqiang5
常规 PCR 与快速检测的区别: 常规 PCR 检测在样本采集后需要进行核酸纯化再进行后续 PCR 反应,纯大概需要约 30 ~ 60 min。通常一块反应板中可够容纳 96 个独立的反应同时进行,(最多检测 91 个样本,外加 5 个质控样本),PCR 反应时间需要约 2 小时左右。而快速检测在样本采集后直接放入裂解液中释放核酸,通常无须进行核酸纯化可以直接进行 PCR 反应,使用快检
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问
请问退火温度如何选择?
huarenqiang5
55℃为选择最适退火温度的起点较为理想。
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问
在PCR技术操作中,是否需要能量,需向溶液中加ATP吗?
丁香52
不需要,能量来自外界加热PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成
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问
请问细胞培养液配置后需要过滤除菌吗?
juyue2010
需要的,严格除菌,需要0.22um的膜过滤,
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问
实验室的静电防护有简单有效的方法吗?
paj12345
不穿带绒,麻质的织物进实验室,静电是摩擦引起的;因此减少实验过程中的摩擦可以减少静电的产生,此外在秋冬季节,适当增加空气湿度,可吸收静电;金属可导电,可以在做完实验后定期接触金属制品导走身上的静电。
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问
蛋白表达~求助
SnowQuiet
可以将保存菌种活化后,再进行转接摇菌提取蛋白步骤,活性会高一些。
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