实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问求助289kDa蛋白转膜条件及分离胶浓度

huarenqiang5

289KDa蛋白转膜建议用 4%的浓缩胶，6％的分离胶，湿转140v恒压3h。

3 回答770 围观

问污泥中的酶可以提纯吗？

土井挞克树

可以，但是要先确认酶含量，然后进行提纯

3 回答302 围观

问配体外转录体系时模板加入的时机

土井挞克树

在buffer之前加，不然转录容易失败

3 回答293 围观

问粪便非靶向代谢组前处理

土井挞克树

去离子水洗超声，再用甲醇润洗。

3 回答258 围观

问质粒提取浓度65—99 ng/ul，浓度低吗

申东熙老伯

质粒浓度不高，但是上样量够了，如果正确的话肯定是很亮的条带，你这个质粒不太正常...

5 回答13440 围观

问肺纤维化小鼠造模方法？

土井挞克树

目前用于模型制作的诱导剂很多，如博来霉素、百草枯、高浓度氧、石棉以及放射线等均可以引起肺部损伤，最终导致肺纤维化，其中以博来霉素最为常用。

3 回答743 围观

问骨髓细胞做凋亡的qp一般需要做哪几个基因？

天一湖医者

主要包括Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、Mcl-1等

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问MSC需要的试剂？？？

dxy_xextz7w2

用的DEME培养基，胰酶，血清

3 回答593 围观

问有没有接受英文文章的中文期刊

huarenqiang5

可以投《医药卫生》双语版这个。

3 回答337 围观

问有没有做过cell free表达蛋白的大神！

sswei

无细胞技术（cell-free）蛋白质表达上的应用，作为近年来单独列出的蛋白表达系统，主要用于表达膜蛋白等难以在细胞内获取的蛋白。膜蛋白在细胞间联系、表面识别、细胞骨架接触、信号传导、酶活性及物质运输中扮演了重要角色。由于其具有多种细胞功能，膜蛋白是非常理想的药物靶标。但是，膜蛋白的其复杂的优化过程使得纯化非常困难并且耗费时间。无细胞技术可以用来来获得高得率的可溶性的膜蛋白。在无细胞技术无细胞技

3 回答710 围观

问PC12细胞莫名死亡

天一湖医者

培养基污染，耗材污染，环境污染，培养箱污染，细胞冻存时污染，人为操作污染，一切都有可能

5 回答750 围观

问流式细胞仪

sswei

流式细胞仪操作注意点:1. 因实验需保证待检测样品细胞为单细胞悬液，因此在细胞培养、制备阶段，贴壁细胞需用先用胰酶消化成单个细胞，而后再后收集待测样品细胞；胸腺、脾脏和淋巴结等外周免疫器官，主要由免疫细胞组成，只需直接将脏器经钢网研磨即可制成单细胞悬液；实体脏器肺脏、肝脏和肿瘤组织内含有较多的结缔组织，而实体脏器细胞之间一般结合紧密，所以直接简单的将脏器进行研磨是无法得到理想的单细胞悬液的，因此，

4 回答495 围观

问基因回补具体实验步骤

huarenqiang5

副溶血弧菌基因回补实验方法的建立重组质粒的构建和鉴定利用限制性内切酶Xba I和 Hind Ⅲ对载体pBAD33和目的基因片段aphA、 opaR分别进行双酶切,将aphA和opaR基因酶切产物和质粒酶切产物按6:1摩尔比,经TDNA连接酶4℃连接12 h。连接产物化学转化入E.coli DH5a感受态细胞,涂布于Cm 10 ug/ml抗性的LB平板,37 ℃恒温倒置培养至出现单克隆

3 回答7885 围观

问为什么细胞使用不同浓度的药物处理后，cck-8结果不理想？

不做科研趴菜

药物处理前关注细胞状态，分细胞时尽量密度均一

4 回答1261 围观

问论文写作范围请教

羽2BRD

可以写啊，相关的心理研究都行的。比如青少年犯罪与心理健康的相关性分析。

5 回答234 围观

问cytoscape可以实现两组基因的KEGG/GO分析的对比吗，如果可以是怎么操作呢

loveliufudan

对于两组基因的KEGG/GO分析的对比，Cytoscape可以使用插件EnrichmentMap来实现。下面是大致的操作步骤：安装EnrichmentMap插件：在Cytoscape菜单栏中选择“Plugins”->“Manage Plugins”，在搜索框中输入“EnrichmentMap”，找到该插件并点击“Install”。导入基因集数据：将两组基因的KEGG/GO分析结果导出为两个独

3 回答523 围观

问求助！细胞污染

dunima

大多数细菌对紫外还是很敏感的，所以影响不大，但除了台子消毒以外，环境最好也紫外照一下

10 回答361 围观

问求助：使用lipo3000向hepg2细胞内转染siRNA失败

loveliufudan

根据你提供的实验步骤和结果，我可以提出一些可能需要改进的方面：细胞密度：你使用的细胞密度可能需要调整。对于HepG2细胞，推荐的密度是每孔5-8万个细胞。如果使用的细胞太多，可能会影响转染效率。转染试剂：你使用的是Lipo3000试剂，可能需要考虑更换其他转染试剂进行比较。例如，使用RNAiMAX试剂或者JetPRIME试剂等。需要注意的是，不同的试剂可能适用于不同的细胞类型，需要根据自己的实验条

4 回答3211 围观

问HE染色结果

土井挞克树

脱水有些过度了，已经丧失了正常的状态。

5 回答958 围观

问miRNA的逆转录内参在10左右，目的miR测不出来，怎么搞

dxy_rt9z23i7

我也用的诺唯赞的这两个试剂盒，逆转引物用的诺唯赞他们的软件设计的。内参和目的miRNA的引物要分开两个管子逆转，不然的话会有误差。本来基因组里内参的表达量和你的目的miRNA的表达量是不一样的，内参逆转产物之后点Qpcr的时候是要稀释的，目的miRNA的表达量一般都比较低，不用稀释，我自己是这么做的，能做出来。

4 回答510 围观

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