实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问设置程序的时候体系是10微，实际是20微，对结果影响大吗？

z流沙z

这个问题不大，主要是程序正确就行

3 回答335 围观

问有什么能保证3个平行孔扩增曲线一致的加样技巧吗？

z流沙z

配制成预混液，然后分到每个管里面

3 回答127 围观

问内参不齐会对结果有很大的影响吗？差距多少才算齐？怎么保证内参齐呢

伯乐生命医学产品

内参不齐会对结果有影响，影响大小与差异大小有关。不同样本的内参差距建议在10倍以内，约3.3个Ct值。起始RNA含量一致，完整性相似就可以保证内参基本一致。

4 回答8125 围观

问突触电镜

sswei

可以借助相关的软件进行分折，如Nano Measurer等。

3 回答1579 围观

问生存分析中，一组数据的标准误±SE>10%,还可以继续用K-M曲线进行组间比较吗？

loveliufudan

生存分析中的标准误（SE）是衡量估计值（例如Kaplan-Meier生存曲线的估计值）的不确定性的一种方法。SE值越小，表明估计值越可靠。SE值大于10%可能意味着估计值的不确定性较高，但并不一定意味着无法继续使用Kaplan-Meier曲线进行比较。需要根据具体情况来判断。对于您的数据，下肢组只有20个样本，而上肢组有120个样本，这意味着您的下肢组的样本容量相对较小。在这种情况下，即使SE值大

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问Gelma水凝胶合成

sswei

注意事项：1、配制溶液时务必避免强光、阳光直射，勿暴露于日光灯照射下超过5分钟。2、配制完的GelMA请尽快使用，配好的溶液可在-20℃避光条件下储存1周。在低于21℃的环境中，GelMA溶液会冷凝成固态，属正常现象，加热即可恢复液态。（光交联不可逆）3、配制溶液浓度可在5%-30%(w/v)范围内，低于5%可能无法固化，无特殊用途一般不高于30%。推荐使用10%浓度。

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问投复方选哪个期刊

土井挞克树

可以试一试JournalofEthnopharmacology（JEP）

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问组织iNOS蛋白wb

z流沙z

我跑过差不多大小的，8%的胶，80v 40min+130v 60min，差不多就够了，然后转膜200mA 2h也够了，建议牛奶封闭1-2h。另外建议跑不出来的时候，极限增加上样量，一个是样品浓度要高，一个是增加上样，可以上40-50ul

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问求教：SKOV3和SKOV3/DDP形态差异在哪里？

土井挞克树

极化状态不同，一般DDP极化要强一些

2 回答447 围观

问transwell小室回收

土井挞克树

二次利用的话还是需要再次铺基质胶的。

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问Ras通路激活因子

土井挞克树

一般用生长因子如EGF、PDGF、FGF等来进行激活

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问求教临床样本组织跑qRT-PCR的一些问题

土井挞克树

可能是pcr过程中目的基因存在降解导致结果不准确

2 回答283 围观

问原代细胞提取

sswei

存在可能原因:1、细胞的传代最重要的是胰酶处理时间：消化不够细胞本身就是成团的；若胰酶处理太久，容易造成细胞膜蛋白损伤，使细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。2、缺少贴壁因子：血清中含有促贴壁因子，而无血清培养基工艺中由于缺少这种促贴壁因子，细胞的贴壁效果会下降很多。3、支原体或细菌的污染。4、培养液配置、储存不当，如pH值过碱，Gln量太少等原因。5、复苏的细胞本

3 回答635 围观

问有做生物被膜的UU吗为啥结晶紫染色结果和肉眼看的相反

Topmicro

生物被膜是细胞内外界面的分界线，由脂质双分子层和相关的蛋白质和糖类组成。在生物被膜研究中，常用结晶紫等染料对被膜进行染色。然而，经过染色后观察到的结果与肉眼看到的是相反的。这是因为在染色过程中，染料会与被膜中的负电性磷脂头基发生作用，进而产生电荷屏蔽作用，这导致了磷脂双层的排列方式发生了改变。因此，结晶紫染色后的被膜呈现出的是一个不均匀、斑驳的外观，与真实的被膜结构是不同的。而肉眼观察到的被膜外观

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问各位大佬，我这个蛋白不压缩是怎么回事啊，一大坨下来了，marker也能散开点，电压是80v,胶凝固的时间按说明书上来的

balalaLy

marker没问题，胶没问题，所以应该是loading buffer的问题，有些loading里面含有的巯基乙醇量少或者没有就会压缩不好

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问酵母菌GS115感受态制备

loveliufudan

划线可以避免菌落过多过密，对于大规模制备酵母感受态的情况下，可以更方便地定量接种适量的菌落。但是如果您使用保种的方法接种，也是可以的，只需要注意接种时需要保证接种量一致即可。感受态酵母菌的电转过程中，吹打菌液可能会对电转效果产生一定影响，因为吹打过程中可能会使得酵母菌的细胞壁受到损伤。为了最大限度地保证电转成功，建议在吹打之前将菌落以PBS等缓冲液洗涤干净，然后用吸头将菌落捡起来放入电转管中，避免

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问求助酒精性肝损伤造模

sswei

参照四氯化碳肝损伤模型，联苯双酯用量为每公斤体重150mg。

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问生物膜染色清洗

晴空a

解决办法：改善进水水质，调解合理PH值等。

3 回答878 围观

问斑马鱼胚胎发育时空图谱有助于我们理解哪些胚胎发育过程中的模式形成及相关分子机理？

sswei

时空组相对应时间点的胚胎，进行单细胞测序，并利用SPOTlight整合scRNA-seq和Stereo-seq数据，绘制了斑马鱼胚胎的空间发育轨迹。最后，通过计算空间中不同时间点中配体-受体对的相对距离，发现在胚胎发育中具有潜在互作关系的配体-受体对，并确认了其在发育中具有的潜在调控功能。在10 μm的分辨率下，对不同时间点的斑马鱼胚胎进行了空间区域的划分，区分出不同组织边界。同时通过进一步的细化

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问如何进行T淋巴细胞体外培养法？

sswei

T淋巴细胞体外培养法T淋巴细胞转化试验（T细胞增殖试验）实验步骤1. 小鼠脾细胞悬液的制备取一个灭菌的平皿，加入5 ml Hank's液。颈椎脱臼法处死小鼠，取脾脏，放入平皿中，在钢网上研磨并过筛，制成细胞悬液。取出100 μl用于计数。将其余细胞悬液移入一离心管中，离心1500 rpm，7 min，（或1000 rpm，10 min）弃去上清，用RPMI1640 培养液稀释，制成2.5×10

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