实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问请问脾细胞用贴壁培养板（treated）培养，淋巴细胞是贴壁，沉底，还是悬浮呀

土井挞克树

一般来说淋巴细胞是贴壁的，如果密度过大可能会沉底。

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问细胞污染求助

balalaLy

这些应该就是状态不好变圆肿胀然后死掉的细胞

5 回答243 围观

问请问这种细胞是什么情况，属于污染吗？

土井挞克树

看着像是胰酶消化过度，建议减少消化时间。

5 回答415 围观

问关于单细胞测序数据分析

loveliufudan

对于单细胞测序数据，进行质控的步骤通常包括以下几个方面：去除低质量细胞：根据细胞的RNA质量、UMI数量等指标去除低质量细胞，以保证后续的分析质量。过滤低表达基因：根据不同数据集的表达水平和目标分析，设定表达阈值，过滤掉低表达的基因，以降低噪音的影响。校正批次效应：校正不同批次、实验或平台之间的表达量差异，以提高分析的可靠性。去除PCR扩增倍数过高的细胞：对于单细胞测序，由于PCR扩增，可能导致同

3 回答508 围观

问单细胞样品制备无法避免细胞粘连

loveliufudan

如果难以彻底将细胞吹散，可以考虑采用其他细胞分离的方法，如机械剪切或酶消化等。此外，为了获得特定类型细胞的测序结果，可以采用细胞分选技术。以下是一些常用的细胞分选方法：流式细胞术：使用细胞表面标记分选目标细胞。磁性细胞分选法：使用与目标细胞表面标记结合的磁珠进行分选。微流控芯片：通过微流控芯片中的结构和流体调控，实现目标细胞的分选。免疫磁珠分选：使用特异性抗体结合目标细胞表面标记，然后使用磁珠分选

5 回答274 围观

问transwell实验中上下室的不加血请和加血请的培养基的比例对实验的影响大吗

小刘小刘世界一流FVJ4

是有一定影响的，可能会使细胞迁移减少，但是我有次做实验弄错了，上下室都是加的10%的血清，最后也能看到不少细胞迁移。可能是不需要血清的趋化作用细胞本身就有穿过小室的能力

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问第一次要自己设计实验想请问有没有人做过金纳米颗粒 PCR ？是否有详细的步骤能参考？

loveliufudan

金纳米颗粒PCR（Gold Nanoparticle PCR）是一种利用金纳米颗粒作为PCR信号放大的探针，其灵敏度高于传统PCR。下面是一些步骤和建议，供您参考：1.准备PCR反应体系：根据实验需要，制备PCR反应体系，通常包括PCR引物、dNTP、Taq聚合酶、MgCl2和PCR缓冲液等。可根据实验需要，将金纳米颗粒直接加入PCR反应体系中，或使用金纳米颗粒探针。2.制备金纳米颗粒探针：金纳米

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问2型糖尿病模型，检测ELISA胰岛素水平，抽大鼠什么部位的血液啊？一般需要多少血量？注意什么吗？谢谢！

此用户已注销

尾静脉、眼眶采血均可，取血量看试剂盒要求，一般每次0.1-0.2ml就够了

4 回答567 围观

问WB曝光后请问为什么会出现这种黑色条带（右边两组和该组样品为同种）

sswei

膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合。

5 回答4096 围观

问酵母菌感受态制备方法

loveliufudan

很难确定哪种方法更适合准备酵母细胞进行转化。两种方法都有涉及洗涤和重悬细胞的几个步骤，这些步骤是为了去除任何可能降低转化效率的污染物或抑制物质。然而，第二种方法在细胞重悬的步骤中涉及的步骤较少，这可能有利于节省时间并最小化细胞损失。

2 回答698 围观

问TEM图片有些结构比较黑是因为内部结构重叠吗？

loveliufudan

是的，有时候TEM图片中出现的黑暗区域可能是由于样品内部的结构重叠所导致的。这可能是由于样品中的结构太密集，或者像素分辨率不够高，无法清晰地分辨出内部的细节。在这种情况下，使用更高的像素分辨率或者采用其他成像技术可能会有所帮助，比如使用Cryo-EM等。

3 回答1236 围观

问我在进行声动力实验，用的姜黄素做溶质，二甲基亚砜做溶剂，用DPBF是指示剂，但是超声作用后吸光度不变

loveliufudan

在超声波处理样品时，吸光度不变可能表明样品没有发生化学反应或发生的反应不明显。这可能是由于您使用的溶质和溶剂的选择不适合您的实验。姜黄素和二甲基亚砜是常用的生物试剂，但它们可能会与您正在研究的化合物相互作用，影响您的结果。

2 回答904 围观

问提取RNA用的真菌培养过长时间会有什么影响吗？

loveliufudan

长时间的培养可能会对RNA的质量产生影响，导致RNA降解、破裂、变性或者受到其他形式的损伤，从而影响RNA的纯度和完整性。对于曲霉菌这类真菌，其RNA在培养过程中也可能会被分泌酶或细胞外酶降解，进一步影响RNA的质量。因此，如果要提取RNA，最好是在菌细胞处于最佳生长状态时进行，一般是在菌落刚刚形成或在对数生长期进行提取。对于您目前培养了10天的曲霉菌，可以先进行RNA提取，但需要注意RNA的纯度

5 回答649 围观

问L请问Hela细胞这是黑胶虫吗。

小刘小刘世界一流FVJ4

黑胶虫这个概念其实是没有官方认证的，脏的可能是某种耐药细菌或者支原体或者衣原体。一般遇到这种问题我会直接把细胞扔掉，因为我曾经尝试过很多挽救方式，比如pbs清洗多次，每天更换新鲜培养基等，最后却越长越多，如果能和细胞共存还好，可是有些长多了就会导致细胞破裂，最后整个培养基都是混浊的，如果你的没长很多而且细胞状态还好，那就赶紧做实验吧。此外，如果细胞珍贵不舍得扔，还可以试试黑胶虫清除试剂或者支原体清

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问定量PCR二次扩增GAPDH出现拖影

loveliufudan

定量PCR二次扩增GAPDH出现拖影可能会影响结果的准确性，建议排除掉拖影问题后再进行数据分析。拖影一般是由于PCR反应过程中，引物结合到非特异性模板上扩增所导致的。这种非特异性扩增可能是由于PCR反应条件不恰当或引物设计不合理所导致的。以下是一些可能导致PCR反应中出现拖影的原因和解决方法：PCR反应条件不恰当：PCR反应温度过低或时间过长，会导致扩增产物不特异性地结合到非特定的模板上，从而导致

3 回答440 围观

问荧光定量的曲线是这样的，是不是证明这个引物不特异呀

loveliufudan

可能是引物不特异，但也有其他可能的原因。以下是一些可能导致PCR曲线出现此类现象的原因：引物设计不合理：引物设计可能存在一些问题，如引物长度、序列不合适等，会导致引物与非特定模板结合并扩增，从而导致此结果。模板DNA存在杂质：模板DNA存在杂质可能会导致PCR反应出现此类现象。例如，存在其他DNA片段或残留的基因组DNA片段可能会被引物扩增，从而产生这种结果。反应条件不合适：PCR反应的温度、时间

4 回答193 围观

问请问APX计算式子是什么哇

loveliufudan

APX是抗坏血酸过氧化物酶的缩写，其计算式如下：APX活性（unit/mg）=ΔA/min×V/（ε×m）其中，ΔA/min表示单位时间内反应体系的吸光度变化值，V表示反应体系的总体积，ε表示反应产物的摩尔吸光系数，m表示酶样品的质量。需要注意的是，APX活性的计算需要使用反应的线性阶段，以避免酶的饱和效应对计算结果的影响。

2 回答1420 围观

问Hela细胞这样？算正常吗？求问大佬

loveliufudan

形态正常，但是细胞密度偏大，建议控制一下细胞密度，控制细胞密度不仅仅是为了维持细胞生长状态，还可以影响细胞的代谢、细胞功能以及相关实验结果的准确性。因此，选择适当的措施来调节细胞密度非常重要。

4 回答346 围观

问求教：检验科仪器检测小鼠样本？

此用户已注销

不影响，使用前后进行程序清洁即可

5 回答443 围观

问求助，细胞污染？

dengjun007

细胞碎片可能是细胞的分泌物或者是其他的物质，需要明确一下该物质的性质和如何处理这个物质而不使这个细胞变质。

5 回答283 围观

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