实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问HepG2如何和肝星状细胞共培养？有哪些方法？

Dr_劉医生

HepG2和肝星状细胞的共培养方法有很多种，主要分为间接培养和直接培养。当您将HepG2和肝星状细胞分别培养时，您可以按照以下步骤进行：将HepG2和肝星状细胞分别接种在含有适当培养基的培养皿中。在37℃、5% CO2的恒温培养箱中培养细胞。收集细胞，将它们混合在一起。另一种方法是：将HepG2和肝星状细胞分别接种在含有适当培养基的培养皿中。在37℃、5% CO2的恒温培养箱中培养细胞。收集Hep

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问用trizol法怎么提取血清中的rna？

loveliufudan

Trizol法主要是用于从细胞或组织中提取RNA，而血清中的RNA含量较少，且被其他物质干扰，所以提取血清中的RNA需要特殊处理。以下是一种适用于Trizol法提取血清中RNA的方法：准备血清样品：收集血液，用离心将血液分离成血清和红细胞。将血清取出，可以使用超低温冰箱或液氮进行冻存。加入Trizol：在提取RNA前，将血清样品从超低温冰箱或液氮中取出，加入适量的Trizol试剂，如10%体积比，

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问请问用金标数码定量分析仪检测HCG的粗品，与HCG成品的IU校价，怎么操作或稀释

loveliufudan

使用该仪器检测HCG的粗品和成品的U校价，需要进行以下操作：准备样品：将HCG粗品和成品分别制成适当浓度的样品，可以通过稀释样品来获得适当的浓度。确保样品无污染，并按照金标数码定量分析仪的要求进行标记。打开仪器：按照金标数码定量分析仪的操作手册打开仪器，预热并进行校准。加样：根据仪器的操作手册将样品加入样品槽中，注意不要超出仪器的量程范围。进行分析：按照仪器的操作手册进行分析，一般需要进行多次重复

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问空白组也出现了flag标记怎么回事

sswei

试样中除待测组分外的其它组分的干扰。

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问要测急毒的LD50,但是雌雄差异大，是要分开测LD50吗?

sswei

由于雌雄差异大，测LD50需要分开。

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问石蜡切片提取RNA的方法，有没有人做过呢？求

sswei

操作步骤：1. 准备：无水乙醇、生理盐水、二甲苯及无RNA酶1.5mL离心管。2. 取出析出液和洗涤液，按以下操作：a) 析出液：4.5mL加25.5mL无水乙醇，混匀；9mL加51mL无水乙醇，混匀。b) 洗涤液：9mL加21mL无水乙醇，混匀；18mL加42mL无水乙醇，混匀。c) 配制好的析出液及洗涤液如出现沉淀，可在37℃溶解，摇匀后使用。3. 样本处理：a) 取5-8 μm 厚石蜡切片5

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问为什么在设计shRNA的时候，要在前面加G，看到好多都是确保RNA聚合酶转录，到底是怎么发生的呢

土井挞克树

因为G的稳定性最好，有利于转录，而其他碱基的稳定性差

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问fresh hormone-deprived medium是什么，与无血清培养基SFM有什么区别？

Dr_劉医生

fresh hormone-deprived medium是指不含激素的培养基，而无血清培养基SFM是指不含血清的培养基。这两种培养基的区别在于，fresh hormone-deprived medium不含激素，而无血清培养基SFM不含血清。

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问脓毒血症细胞模型怎么提取？

Dr_劉医生

脓毒血症细胞模型的提取方法有很多种，其中一种是通过单细胞测序来提取。既往的研究也显示从脓毒症患者提取CD14+的单核细胞，其HLA-DR表达量较低。可以参考一下几篇文章：1、肺炎诱发脓毒血症的脓毒症患者的Treg / Th17，Th1 / Th2和M1 / M2细胞比率。2、早期研究已经证明组织因子-FVII7a在脓毒症相关模型中的关键作用。

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问试剂盒提取RNA，中间可以暂停嘛，储存条件是什么，能暂停多久？

sswei

如果只是短期储存，重悬的RNA应放置于-20°C；如果是长期储存的话，就应该放置于-80°C。储存RNA时，可以加入少量的RNA酶抑制剂（RP5601），避免RNA的降解，RNA可以直接做下游实验。如果要长期保存RNA，可以加入RNAlong。

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问求助联合药物干预细胞浓度

Dr_劉医生

建议A和B组各设置一个单药+空白的对照组，然后A+B联合组作为实验组，然后观察各组干预浓度的效果，以确定目标浓度

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问能不能帮我看看这个水稻叶片结构里面怎么看泡状细胞呀

土井挞克树

泡状细胞一般是位于叶片轴面的薄壁细胞，下图是泡状细胞的示意图可以对比参考。

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问口腔鳞癌细胞CAL27

sswei

从镜下看该细胞形态属于正常的情况。

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问求助：提的大鼠原代星形胶质细胞形态感觉不太对

z流沙z

5只老鼠分别放5个培养瓶，这个可能是密度太高导致细胞挤在一起

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问Caco-2细胞（caco2细胞）培养，lps刺激

Topmicro

需要确定一下干预时间，另外浓度是否合理？

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问Calcein释放实验检测细胞毒性T淋巴细胞活性实验-求助

loveliufudan

1.对于T细胞的共培养，一般需要用Beads（例如CD3/CD28 beads）来活化T细胞。活化时间一般为24-48小时，根据具体实验目的和试剂厂家建议来确定。在进行共培养前，需要计数细胞数以确保实验的可重复性和可比性。2.目标细胞使用2000-5000个进行共培养一般是没有问题的，但是具体的细胞数应该根据实验目的和细胞类型来确定。3.自发释放组的荧光值超高可能与实验条件有关，例如细胞密度、温度

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问各位师兄师姐，为什么我跑出来的胶图会是这样的呢？CDNA，用的KOD plus Neo

是TTT

marker好，排除跑胶的问题条带拖尾考虑是不是酶切地不好，或者说是连接效率不行

4 回答578 围观

问用什么实验方法明确烧伤创面皮肤愈合质量？

土井挞克树

可以试用划痕法在单层培养细胞间制作划痕以产生愈伤区域，然后监控该伤口周围细胞的向划痕迁移的现象，即伤口愈合。改变细胞迁移和/或生长的因素可以增加或降低伤口愈合率。

4 回答523 围观

问中国医学影像学杂志投稿

呆呆萌萌小小之

发邮件问一下编辑就行了，一般都不会为难你的

4 回答284 围观

问求助：小鼠mcao模型

dxy_n2jej7q0

楼主，这个感觉是静脉啊，如果找到颈总动脉应该是有搏动的，旁边有伴行的动脉和神经，分叉口基本在上方斜行的肌肉下面，颈内是靠外侧那根，如下面这张图右侧下方是颈内，一般都是颈正中剪开皮肤

3 回答447 围观

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