实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问NK细胞培养计数

sswei

NK细胞铺孔用96孔，一般一周换液。

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问求助肿瘤细胞灭活方法

sswei

丝裂霉素C可使细胞的DNA解聚，同时阻碍DNA的复制，从而抑制肿瘤细胞分裂。灭活肿瘤细胞药物有博来霉素、卡瑞利珠单抗、甲苯磺酸索拉非尼等药物

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问噬菌体电镜

土井挞克树

需要进行醛类灭活，可以使用邻苯二甲醛

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问Aβ冻干求助帖

loveliufudan

白色棉状团状物的形成可能是由于AB42在HFIP溶解后冻干的过程中发生了聚集。HFIP（1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙酮）通常用于将蛋白质或多肽溶解并形成β-折叠结构，以便进一步研究。然而，当HFIP溶解后冻干时间较长或条件不合适时，可能会导致聚集的形成。聚集通常会导致蛋白质或多肽的构象和性质的改变。因此，白色棉状团状物可能不再是AB42的单体形式。在这种情况下，直接用DMSO溶解可能无法恢

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问求助求助

土井挞克树

npn一般都是用乙醇进行溶解的。

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问Western blot 显影为什么背景这么黑

loveliufudan

以下是一些可能的原因： 1. 抗体交叉反应：背景黑暗可能是由于使用的抗体与非特定的蛋白质结合，导致背景信号增加。确保您的抗体具有高度特异性，并进行适当的阴性对照。 2. 非特异结合：背景黑暗可能是由于非特异性的蛋白质与二抗或其他试剂结合，产生非特异的信号。优化和调整二抗的浓度和处理条件可能有助于减少这种结合。 3. 过度的洗涤步骤：洗涤步骤是去除非特异性结合的关键。如果洗涤步骤不充分，未结合的试剂

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问cck8实验，测OD值前更换培养液（原培养液中有还原性物质），需要用PBS清洗几次？怎么轻缓冲洗？

dxyc42u

用pbs洗一次即可，加入pbs后挺轻晃动培养板就行

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问MHC四聚体怎么做啊？检测抗原特异性T 细胞增殖

loveliufudan

制备MHC（主要组织相容性复合物）四聚体用于检测抗原特异性的丁细胞增殖是一个复杂的实验过程。以下是一般的步骤概述： 1. 克隆T细胞：从免疫动物或人体中获得特定的T细胞克隆，这些细胞在识别和结合特定抗原时会发生增殖。 2. 提取MHC分子：从目标组织或细胞中提取目标MHC分子，通常是MHC I或MHC II分子。 3. 生物素化：将目标MHC分子与生物素标记的分子（例如生物素化的二抗）进行反应，以

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问影响lamp的物质或者试剂有哪些呀

loveliufudan

影响LAMP反应的物质或试剂主要包括以下几个方面： 1. DNA模板：LAMP反应需要目标DNA序列作为扩增的起始物。DNA模板的质量和纯度会直接影响扩增效率和特异性。高质量、纯净的DNA模板可以提高LAMP反应的可靠性。 2. 引物设计：LAMP反应需要多个引物，包括2个外部引物（F3和B3）以及2个内部引物（FIP和BIP）。引物的设计需要考虑目标序列的特异性和互补性，以确保有效的扩增。合适的

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问除了糖，包被稀释液的保护剂还可以用哪些？

sswei

包被稀释液的保护剂是EDTA、甘氨酸、果糖、青霉素钠。

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问求助|肿瘤浸润淋巴细胞提取

huarenqiang5

从乳腺癌实体组织中提取肿瘤浸润淋巴细胞，建议用percoll40/80浓度试试。

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问关于测定线粒体功能方法的求助帖

loveliufudan

要评估特定心脏病患者的线粒体功能，可以使用以下方法来测定线粒体相关功能： 1. 呼吸链酶活性测定：通过测定心肌组织或血液样本中的呼吸链酶活性，如线粒体复合物I、II、III、IV和V的活性，可以评估线粒体的氧化磷酸化功能。 2. 线粒体膜电位测定：使用荧光探针（如JC-1或TMRE）来测量线粒体膜电位，线粒体膜电位的降低可能表示线粒体功能异常。 3. ATP产量测定：通过测量心肌组织或血液样本中的

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问精密度实验

土井挞克树

1. 样品准备：需要将不同的样品收集并研磨成细粉，然后取一定量的样品称量，制备成标准溶液。2. 仪器准备：准备好高效液相色谱仪（HPLC）及相关配件，比如色谱柱、移液管、封口膜等。3. 建立分析方法：按照样品的特点和目的设定适当的分析方法，例如选择合适的检测波长、流速和梯度程序等。4. 进行样品分析：将标准溶液以及待测样品注入HPLC中进行分析，并记录分析结果。5. 数据处理：根据分析结果计算出样

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问我只做细菌同源性比对、SNP和inDel分析、耐药基因注释和突变，请问做测序草图够用吗？

土井挞克树

同源性比对和基因注释用测序草图够了，如果想进一步说明snp分析则需要更具体的测序结果

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问胶质细胞吞噬研究

huarenqiang5

传代方法有两种:一种方法可以直接用细胞刮子刮下细胞，接种到新的培养皿中；另一种方法就是用0.25%胰酶+0.04%的EDTA消化后，进行传代。

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问裂解组织

dxyc42u

RIPA缓冲液中剪碎组织后，转移到匀浆器中，加足5ml RIPA缓冲液，研磨20min.

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问细胞活力

sswei

MTT和CCK-8原理基本是一致的，但存在如下的区别：1、常规操作的MTT法受药物本身的颜色、培养基的颜色、血清的浓度使结果的变异较大。如采用MTT改进法将有效的降低试验的飘变率。2、CCK-8是最近新出现的方法，它操作简便、结果变异率小。对悬浮细胞的测定有它独到的地方！CCK-8为黄色的，要采用无酚红的培养基进行测量！所以两者测量时出现不一致现象。

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问基因定位+660K芯片

土井挞克树

可以用小麦穗部性状的660k芯片进行矮秆基因定位

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问大鼠PBMC分离能不能用中性粒细胞分离液

loveliufudan

中性粒细胞分离液分离出的PBMC和淋巴细胞分离液分离出的PBMC的主要区别在于他们的成分。淋巴细胞分离液一般会分离出更纯净的淋巴细胞和单核细胞，而中性粒细胞分离液分离出的PBMC可能包含更多类型的细胞，包括某些没有完全分离的中性粒细胞。另外，这两种方法的细胞恢复率和活性也可能会有所不同，具体可能取决于样本的类型和状态，以及分离程序的具体操作。因此，你应该根据你的实验目标和需要来选择适合的分离液和分

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问TBD人中性粒分离液实验细节求教

dxyc42u

就按说明书上操作，不同牌子试剂要求不一样

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