190kDa的蛋白怎么跑WB？

目的蛋白分子量是191kDa，内参GAPDH，雅酶PAGE凝胶快速制备试剂盒（6%），说明书建议电泳时间为150V、50min或200V、35min。用的是三色预染蛋白Marker，150V恒压电泳50min，220mA恒流转膜3小时（湿转，冰水混合物）。做了好几次WB，只有一次目的条带和内参都出来了。200V、35min电泳也跑过，内参跑没了，请问一下大家实验条件有什么需要改进的地方吗？