养3T3细胞和原代脂肪细胞，有小黑点，看了下好像是黑胶虫，试着重新配了培养液，洗了培养箱，但是培养箱里别人细胞没问题，怎么回事？

那可能是原代细胞复苏过程中被污染了，重新杀毒杀菌就可以

如果同样环境，别人的细胞没事，你的细胞有事的，那可能就是你的操作过程有问题，你还是仔细回忆一下看看吧。

处理方法

若细胞状态尚可，添加黑胶虫/支原体抑制剂培养2-3代即可转阴；若细胞状态很差，建议消杀后丢弃。

预防措施

实验进行前，超净台用紫外灯照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超净台台面，并开启超净台风机运转5-10min再开始实验操作；

实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内；实验用品用完应移出超净台，以利于空气的流通；实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面；

每次操作只处理一种细胞，即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基，避免细胞间的交叉污染；

操作时小心取用无菌的物品，避免污染。勿碰触吸管尖头，不小心碰触后应立即更换；不要在打开的容器瓶口正上方操作，容器打开后，倾斜45°操作，操作完成后及时盖上瓶盖；

CO2培养箱的清洁是较易被忽视的地方，应1-2个月对培养箱定期进行清洁消毒。

先用75%酒精擦拭培养箱内壁、隔板、水盘2-3次，用双蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，最后紫外灯照射4h以上。水盘内加入无菌水（应每周更换），待培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定后再放入细胞；

定期清洗或更换超净台过滤膜、预滤网。

在养3T3细胞和原代脂肪细胞时，避免黑胶虫污染是非常重要的。以下是一些预防黑胶虫污染的建议：

细胞复苏时，应使用无菌技术，确保所有器具和试剂都经过严格消毒处理。

细胞培养过程中，定期更换培养基和细胞培养器，并保持细胞培养器表面的清洁。

使用一次性细胞培养瓶或经过消毒处理的器具，避免交叉污染。

定期进行细胞传代和扩增，避免细胞密度过大，导致细胞间竞争加剧和细胞死亡。

在操作过程中，要严格遵守无菌操作规程，如戴手套、口罩、帽子等。

在实验室内，保持空气清新、环境整洁，定期进行消毒处理。

在细胞培养过程中，可以使用适当的抗生素来预防细菌和真菌污染。

如果发现细胞出现异常情况，如生长缓慢、形态异常等，应及时检查是否存在污染问题，并进行相应处理。

总之，通过遵循无菌操作规程、定期检查细胞状态、合理控制细胞密度等方法，可以有效地避免黑胶虫污染。