胚胎干细胞总是养几天就死了。

需要注意如下问题：

1.细胞培养时要规范标准。

(1)严格控制无菌操作。

(2)培养环境需要每日观察。

(3)细胞培养基及相关试剂的选择。培养时会用到培养基、血清、试剂等物品但是选择的产品应该是出自正规厂家的优质产品，劣质的产品往往技术不过关其中包含很多有害物质因此不建议不够。

2.细胞扩增时间过长导致细胞老化、生长缓慢。通常MEF细胞培养到3-4代后，增长速度就会明显变慢，因此我们建议培养一段时间后应该用丝裂霉素进行处理、技术并冻存，在需要细胞时复苏后即可使用。

3.hES对培养层细胞的要求。

(1)品系要求不同。

(2)hES饲养层的小鼠细胞应该采取不大于12.5天的小鼠胚胎。

(3)不能够无限扩增通常第二代就应该用丝裂霉素处理。

(4)在铺饲养层之间必须用基质胶来处理下培养板或培养皿。

有可能是污染了，检查下培养环境

以下是一些可能导致胚胎干细胞早期死亡的常见问题和解决方法：

1. 细胞培养条件：确保提供适当的培养条件，包括培养基、培养皿、培养温度和培养时间等。使用合适的培养基和补充物，确保细胞能够获得所需的营养物和生长因子。

2. 细胞密度和传代：细胞密度的管理非常重要，过高或过低的细胞密度都可能对细胞的健康和生存产生负面影响。定期进行细胞传代，以避免细胞过度密集或老化。

3. 检查细菌和真菌污染：确保培养环境的无菌性，经常检查细胞培养物中是否有细菌或真菌的污染。定期进行培养物的无菌性检测和消毒。

4. 细胞处理和操作：在处理细胞时，注意避免过度搅拌或产生气泡，以防止细胞受到机械性损伤。同时，使用合适的培养皿和工具，遵循无菌操作规程。

5. 细胞质量控制：定期检查细胞的质量和健康状况，包括形态观察、增殖速率和表型特征等。如果发现细胞状态异常或存在异常细胞群，则可能需要重新开始培养或使用新的细胞系。

适当增加培养血清的浓度，其次注意规范操作避免污染可以提高成活率