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        细胞铺板

        相关实验:🔥 细胞铺板技术

        别名:Cell planking

        最新修订时间:

        丁香实验推荐阅读

        合作专家 | 孙齐博士

        生理学 首都医科大学

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        审核专家 | 黄玥琳博士

        生理学 大连医科大学

        原理

        单细胞铺板是将细胞培养板的每个孔中预先加入适量完全培养基,充分晃动使培养基浸润整个孔底,随后滴加重悬好的细胞悬液,充分摇晃混匀,将细胞分散,不抱团也不过分空荡。

        材料与仪器

        DMEM 培养基、无菌 PBS、0.25% 胰蛋白酶

        移液器、无菌枪头、无菌 EP 管、6 孔细胞培养板、细胞计数板

        步骤

        (1)细胞培养一段时间,选择生长状态良好且处于对数生长期的细胞;

        (2)弃去旧培养基,PBS 轻柔润洗 3 次;

        (3)弃 PBS,加入 1 mL 0.25% 的胰蛋白酶,覆盖住细胞为宜;

        (4)置于细胞培养箱孵育 2 min 左右,充分消化细胞;

        (5)取出细胞,置于显微镜下观察,摇晃培养皿见细胞缩小变圆且轻微浮动即可及时终止,加等量的完全培养基终止消化;

        (6)轻柔混匀,1000 rpm 离心 5 min,弃上清;

        (7)完全培养基重悬细胞,细胞计数后按 6-8×105 个/孔接种于 6 孔细胞培养板中,每孔已提前加好 1 mL 完全培养基,轻柔混匀,置于细胞培养箱中培养。

        注意事项

        (1)实验前 30 min 对细胞间及超净台进行充分紫外照射;

        (2)进入细胞间更换无菌衣,无菌拖鞋等;

        (3)细胞接种密度 6-8×105 个/孔,需要根据孔板大小而定,以铺至孔的 60~70% 为宜;

        (4)胰蛋白酶消化的时间依据细胞类型而定,最初实验需要设置时间梯度摸索;

        (5)加培养基要充分混匀,保证细胞分布均匀,而不会一处多一处少呈现抱团现象。

        来源:丁香实验

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