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pcr跑胶结果中出现两条条带,小的(不符合我们所需的条带)是由于什么原因造成的啊?

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土井挞克树

pcr跑胶结果中出现两条条带,小的(不符合我们所需的条带)是由于什么原因造成的啊?

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3 个回答

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dxyc42u

有帮助

应该是引物二聚体导致的,重新设计引物

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sswei

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非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2 离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量,往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现,酶量过多有时也会出现非特异性扩增。

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loveliufudan

有帮助

当PCR跑胶结果中出现两条条带,其中一条条带不符合所需的大小时,可能有以下几个可能的原因:

1. 异源污染:小条带可能是由于来自其他样品或实验室环境中的异源DNA污染导致的。在PCR实验中,很容易发生外源DNA的污染,例如其他PCR产物、质粒、引物、试剂或实验室工作台等。请确保在样品处理、引物配制和PCR反应前进行严格的无菌操作,以减少异源污染的可能性。

2. 剪切酶消化问题:如果您在PCR反应中使用了限制性内切酶对PCR产物进行酶切,小条带可能是由于酶切反应不完全造成的。在这种情况下,请确保酶切反应条件正确,并根据酶的特性和引物设计进行优化。

3. 异常扩增产物:小条带可能是由于非特异性扩增、剪切重组或其他PCR异常产物导致的。这可能是由于引物的非特异性结合、模板DNA的异质性或PCR条件的问题。尝试优化PCR反应条件、调整引物浓度或重新设计引物,以获得更特异的PCR产物。

4. PCR假象效应:某些情况下,PCR反应中可能会出现假象效应,其中较大的目的片段可以生成较小的附加片段。这可能是由于引物二聚体形成、PCR扩增过程中的非特异性扩增或其他反应机制导致的。在这种情况下,建议仔细检查引物设计和PCR条件,以减少假象效应的可能性。

综上所述,出现PCR跑胶结果中两条条带,其中一条小条带的原因可能是异源污染、酶切问题、异常扩增产物或PCR假象效应等。需要仔细检查实验步骤、优化反应条件和重新设计引物,以减少这种现象的发生。

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