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        新生鼠处死及表皮细胞提取

        互联网

        5963

        分离表皮细胞,需要新生鼠的皮肤全层。

        不知道有血会不会有影响。用乙醚试试?不会出血

        方法一

        一般用酒精擦拭全身以后,直接用剪刀断头处死,滴尽体内血,用棉球擦干净颈部血,然后大头针固定就好了,不到一分钟就行了,而且不会影响细胞的活力,也没有应激反应。

        方法二

        既然是要分离细胞要注意无菌操作

        1、对乳鼠进行消毒:将乳鼠浸泡在75%的酒精中片刻,或用酒精擦拭乳鼠全身。

        2、处死和放血:用无菌剪刀剪乳鼠的左腋下(相当于心脏的位置)彻底放血。

        3、取材:取的表皮组织置无菌生理盐水或PBS液中清洗,再进行分细胞的处理。

        方法三

        1、将乳鼠浸泡在75%的酒精中浸泡5分钟。(基本上喝酒都喝晕了,还顺便消毒)

        2、再新洁尔灭浸泡5分钟(乳鼠已经挂了,再次消毒)。

        3、捞出来,从颈部做一切口,尾部及四肢一切口,腹部一切口(注意不要切开腹膜),然后一拉皮就下来了。取表皮干细胞就是这么取的,仅供参考!

        方法四

        1)、将表皮再次以0.25%胰酶37度下振荡消化8min左右,加入与胰酶等量的含10% FBS的培养基终止消化后,充分吹打。

        2)、1000rpm/min离心10分钟,弃去上清液及已消化的表皮。

        3)、加入ESCs培养基,充分吹打,制成单细胞悬液。

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