基质胶3D培养干细胞时，如何提取干细胞外泌体

操作步骤：

1)采用含血清培养基培养干细胞，培养至一定时间；

2)然后提取干细胞，将干细胞放置在不含血清的培养基中，培养至一定时间；

3)将步骤2)中的不含血清培养基中的干细胞进行分离，对干细胞进行培养，将细胞培养后的培养基，离心去除杂质；

4)将经过步骤3)中提取的外泌体提取液和含血清培养基液混合后进行培育，培育后得第一孵化液，对第一孵化液进行离心浓缩，得到含外泌体的浓缩液；

5)通过设置将步骤4)中含外泌体的浓缩液加入无菌PBS溶解后加入外泌体提取液进行孵育，孵育后得第二孵化液，将第二孵化液进行离心收集底部沉淀，得细胞外泌体；

6)将步骤5)中收集的液体进行密度梯度离心，将提纯的液体通过收集管进行高纯度外泌体的收集；

7)冷冻储存，对培养后的干细胞外泌体进行深低温冷藏。

将基质胶放在冰上溶解，在六孔板中用预冷的枪头加入1ml用dmem/f12培养基稀释的基质胶，随后孵育1h去除基质胶。

基质胶作为一种三维细胞培养载体，确实存在着提取外泌体时可能会黏住外泌体的风险。不过，仍然有一些方法可以尝试提取外泌体，以下是一些可能可行的方法：

尝试使用非黏附胶：尝试使用不粘附的基质胶，例如聚乙二醇（PEG）等，这样可以减少外泌体黏附的可能性。

使用酶解方法：可以使用一些特定的酶来降解基质胶，释放出细胞和外泌体。例如，可以使用胰酶来降解基质胶，释放出细胞和外泌体。

离心法：首先，将培养基离心收集上清液，再使用超速离心法来沉淀外泌体。这种方法不需要对基质胶进行任何处理，但也有可能会同时沉淀一些基质胶。

染色体方法：可以使用一些特定的染色体来分离基质胶和外泌体。例如，可以使用聚乙烯醇（PVA）来封闭基质胶，再通过筛选膜分离外泌体。

总之，基质胶做胶上的3D细胞培养提取外泌体的方法目前并不十分成熟，需要尝试不同的方法，选择最适合自己实验的方法。同时，也需要进行必要的质量控制，确保提取出的外泌体质量可靠。