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        96孔板 cck8实验加药方式

        相关实验:细胞毒性分析

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        由心生无根生

        我加药时是DMSO溶解的药物母液预混在培养基里,然后吸取5μL以贴壁、贴近液面的方式加入到每孔100μL培养基的细胞中,这样会造成局部浓度过高吗?正确的方式是通过将原先培养基吸走,然后加入100μL配好的对应浓度药物吗?

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        5 个回答

        user-title

        dxyc42u

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        贴壁加入,加入之后晃动培养板这样不会造成局部浓度过高

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        huarenqiang5

        有帮助

        加药的两种方法:

        1.把每一个孔的液体吸出来,再把用培养基配好的药加进去。吸液体的时候,把板子倾斜竖起来70°(方便你看),用200μl的枪调最大量程,套一个200μl枪头再套一个10μl枪头,从孔的最低点把液体吸出来。注意不要一下子把整个板的液体全吸出来,因为你加药前还要每一个浓度都混匀,很费时,最好不要让你的细胞空置太久,一般都是半个板地来。

        2.不吸液,直接加药,不过记住要配2x浓度的药,因为还有之前的培养基,加进去就会稀释成一半了。后续也要加20μl的cck-8(cck-8的量是孔内液体的10%)。注意200μl的体液太满了,很容易洒出来。

        加cck-8 两种选择,一是用10μl的枪头加,先把5ml的cck-8用1.5mlEP管分装(方便操作),用10μl的枪头吸cck-8,注意要把枪头外壁沾的液体揩干净,枪头伸进液面(刚好伸入,不要进太深),打进去不出气泡,这样很费神,而且手慢的,第一个孔和最后一个孔的OD值就有了这十几分钟的误差了;二是用200μl的枪头加,先准备好无血清培养基和cck-8,混匀,然后把96孔板的里的液体一次性全吸出来,枪调110μl,加入含cck-8无血清培养基。这样可以很好地避免微量量程带来的误差。

        user-title

        sswei

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        两种方法,每孔直接加入10ul的CCK-8溶液,或者配置成含10%CCK-8溶液的培养基以换液的形式加入,注意加入过程中避免产生气泡,可以将枪头浸入培养液中缓慢加入。

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        loveliufudan

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        在96孔板中进行CCK8实验时,加药的方法可以有多种,但为了减少药物局部浓度过高的情况,可以尝试以下方法:

        将原先的培养基吸走,然后添加100μL含有正确浓度药物的新培养基,使得药物能够均匀地分布在整个孔中。

        将药物预先溶解在培养基中,形成药物母液,然后将药物母液均匀加入到各个孔中,使得药物浓度均匀分布。

        在上述两种方法中,建议通过试验确定最佳的药物浓度和加药时间,以获得最佳的实验结果。此外,在进行CCK8实验时,还需要注意对照组的设置,以便正确比较不同处理组之间的细胞增殖差异。

        user-title

        balalaLy

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        比较合适的方法是弃掉原有培养基,将配置好工作浓度的培养液,按100ul/孔加入,如果检测48、72小时以上,加入的量可以适当增加。

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