HepG2细胞消化问题
两个半朋友
求助各位，我用的是MEM培养基，1%NEAA，1%Glutamax，1%丙酮酸钠和10%胎牛血清，T25瓶培养，复苏细胞是undefined10的6次方，两天后1：4传代，用1ml 0.25%胰蛋白酶，细胞很难消化，差不多10分钟才消化下来，而且是两三个细胞在一起那种，不是单细胞悬液。两天后再次传代，多加了0.5ml 0.26%的胰蛋白酶，5分钟消化下来，但是计数的时候出现很多细胞结团，反复吹打也吹不开，请问该怎么办呢？有什么建议吗？
3 个回答
balalaLy
有帮助
37度消化5min，消下来转移到15ml管离心、重悬，吹打，然后静置5min左右，大的细胞团块沉淀下来取上面的部分就可以了。
loveliufudan
有帮助
这种情况可能是由于细胞过度繁殖导致的，也可能是由于培养条件不适宜导致的。建议您可以尝试以下措施来解决这个问题：
1.降低细胞复苏密度，在转移细胞时保证细胞数量不超过原有细胞的50%。
2.检查培养基的纯度和储存情况，确保它们的质量良好。
3.检查细胞悬液的清洁度，确保它不含有其他物质，如油脂和蛋白质。
4.在使用胰蛋白酶的时候控制好比例，保证它的浓度适中。
5.尝试使用替代的消化剂，例如TrypLE或EDTA消化。
土井挞克树
有帮助
建议多用pbs冲洗，效果会好一些
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