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        表达的GST蛋白一直不挂柱,无法纯化

        相关实验:细胞蛋白质总量样品的制备及分析

        user-title

        dxy_btpk2zd7

        8M尿素过夜溶解包涵体,梯度透析复性(复性液配方:尿素8/6/4/4/0M(即PBS), 50mM TB 8.0, 100mM NaCl, 10mM DTT, 0.5mM GSSG, 5%甘油 ) 每个梯度12h,最后蛋白部分有活性,但是无法纯化(磁珠和树脂柱子都试了) 蛋白不挂柱子。

        做了大半年了,希望有经验的各位朋友不吝赐教,谢谢~

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        3 个回答

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        先确定你确实表达出了GST蛋白,如果一直不挂柱,感觉是gst没表达出来

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        1. 过GST柱最好先和蛋白溶液孵育1-2小时,然后过柱子效果比直接流过好。

        2. 洗脱液加还原性谷胱甘肽后pH下降很大,所以一定要把pH调回来。

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        可能是上样流速太快,结合时间太短 。可能是缓冲液不合适,柱子平衡不到位 。可能是样品中GST融合蛋白浓度太低 。可能是GST蛋白发生变性或聚集 。

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