实验问答22,833,248 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问雪旺细胞

土井挞克树

分离：通过常规的热酶消化法、组织块法以及冷酶消化对雪旺细胞进行分离培养：雪旺细胞培养通过双差速贴壁和有丝分裂抑制剂阿糖胞苷(Ara-C),去除或抑制成纤维细胞生长,通过成纤维细胞生长因子(bFGF)使雪旺细胞得到进一步增殖.

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问细胞成团，细胞出芽实验！！

土井挞克树

我的做法是离心１０００ｒｐｍ，五分钟，过程尽量避免摇动离心筒，如果细胞少的话，可留少许上清，基本不会丢失细胞．如果是吸走培养液的话，再加新的，就等于传代了

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问求助，人脐带间充质干细胞的提取方法，酶解法好几次了都不成功

huarenqiang5

1.制备:使用生理盐水充分洗涤脐带，并剪成小段。去除动脉和静脉，撕取华通胶至少8ml。充分剪碎后平分至4瓶已加25ml完全培养基的175cm2培养瓶中。静置培养7天。第8天根据生长情况，进行换液、传代。2.换液:根据细胞生长情况与培养基颜色决定全量换液或半量换液。用去头移液管吸弃半量或全量旧培养基，更换移液管，于培养瓶的非细胞培养面缓慢加入等量新培养基。3.传代:每瓶加0.25%胰酶3ml，待细

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问怎样让给药后的细胞恢复状态

loveliufudan

在您的实验中，给细胞低浓度的顺铂处理24小时后撤药，但细胞不能恢复之前的状态，这可能是由于顺铂引起的细胞毒性过大，细胞无法恢复。要让细胞恢复状态，您可以尝试以下方法：适当降低顺铂的浓度：如果细胞对顺铂的毒性过大，可以尝试适当降低顺铂的浓度，或者缩短处理时间，以减少对细胞的影响。加入细胞生长因子：细胞生长因子可以促进细胞生长和分裂，有助于加速细胞恢复。您可以根据实验需求选择适当的细胞生长因子加入到培

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问求助请问癌细胞分裂期有多长时间啊？0.5-2h？

loveliufudan

癌细胞分裂期的时间可以因细胞类型和生长条件而异。一般来说，癌细胞的有丝分裂周期约为 18-24 小时，其中 G2/M 期为 4-6 小时，M 期为 1-2 小时。对于您所做的 H1299 细胞，nocodazole 可以阻止细胞有丝分裂，使大部分细胞停滞在 G2/M 期。如果您想要得到分裂期的细胞，您可以在 nocodazole 处理后等待 1-2 小时，这样细胞应该已经进入 M 期。接着您可以用

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问各位大神救助，这是否为细胞污染，特别重要的细胞！！！

豆豆是个豆

可能也不是污染，可能是死细胞团块，细胞不断增殖不断有状态不好的细胞就会有更多的团块，但是也不排除是污染，保险起见你可以增加双抗的浓度，加到2%以上，PBS里也可以加些双抗，养段时间看着差不多了再把双抗浓度降下来就好。细胞状态还好就有补救的机会！加油！

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问A549 划痕实验

墨幽染染

划痕实验很重要的一个因素就是铺板量，不同细胞的大小不一样，铺板量不一样。就像786-O细胞比较大，96孔板一般铺2-3万细胞/每孔，第二天细胞融合度达到90%以上；而RKO细胞比较小，96孔板一般需要铺7-8万/每孔，第二天细胞融合度差不多达到90%左右。所以具体要根据细胞大小适当调整，细胞划痕铺板密度一般为70-90%之间。密度过低，增殖因素可能会影响迁移能力，反之，对于细胞状态会有影响，以至于

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问肿瘤专业投稿经验

loveliufudan

您可以尝试以下方法来找到帮助修改文章的老师或网站：寻找专业的写作辅导机构或论文编辑服务，这些机构通常会提供专业的写作和编辑服务，帮助您修改文章并提高文章的质量。在线寻找专业的写作指导网站或社区，如Academia.edu、ResearchGate等。这些网站通常会有专业的学者和编辑提供帮助和建议。联系相关专业领域的学者或医学专家，请求他们给予您的文章评价和修改建议。寻找志同道合的作者或论文写作小组

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问细胞状态良好，细胞培养液澄清透明，细胞是前一天传代到新的T175平中，次日观察细胞出现不明物，请问这个是啥啊，是污染么？

土井挞克树

看着像是毛絮污染，可以继续观察。

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问能提取血小板后检测血小板- CD40L吗？

土井挞克树

检测CD40L需要活化的血小板才可以，需要通过流式检测，而且流式是目前最成熟的，你选用别的方法不容易被审稿人认可

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问血管平滑肌细胞表型转换时一定有PDGF改变吗

龙大人驾到

不一定。虽然PDGF、TGFb、VEGF、FGF等因子是常见的调节因子，可以诱导血管平滑肌细胞的表型转换，但并不意味着这些因子是唯一的调节因子。如果平滑肌细胞通过别的因子导致了表型转换，这些调节因子未必会发生改变。此外，血管平滑肌细胞表型转换是一个复杂的过程，可能涉及多个信号通路和调节因子的相互作用，因此需要具体情况具体分析。

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问LPS诱导上皮细胞炎症

龙大人驾到

关于第一个问题，炎症并非只有肿瘤细胞才会发生迁移，一些炎症细胞也可以通过迁移到达炎症部位并发挥作用。此外，炎症过程中细胞增殖和迁移都可能发生改变，因此同时检测细胞增殖和迁移可以更全面地了解炎症过程对细胞的影响。至于为什么没有做凋亡数据，可能是因为凋亡和增殖、迁移不同，需要更复杂的实验设计和分析方法，而且炎症本身就已经是一个复杂的过程，可能没有必要同时考虑所有方面。关于第二个问题，MAPK通路和防御

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问求助！！！请问各位大神多发性骨髓瘤细胞都是怎么养的！！

龙大人驾到

多发性骨髓瘤细胞培养需要选择合适的培养基，如人多发性骨髓瘤细胞专用培养基。一般来说，15%的血清对于多发性骨髓瘤细胞的生长可能不够，建议使用20%的血清。MM1S和8226细胞株都是悬浮生长的细胞，传代时需要注意细胞密度和离心条件。

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问Hek-293细胞求助

相似又互补

你这个很大程度是细胞培养的环境变差了，你可以打扫一下细胞间，清理一下培养箱。

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问3T3细胞诱导：如图镜下有葡萄串脂滴，是诱导成功？为什么文献里的图（1）细胞间距那么大，我的细胞间距都贴在一起（2）？

sswei

镜下有葡萄串脂滴说明诱导成功。也可以用油红O染色法鉴定细胞是否诱导成功。

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问血清替代物支原体qPCR检测样本的最低检测限及样本前处理的具体操作？

loveliufudan

关于血清替代物支原体qPCR检测样本的最低检测限和样本前处理的具体操作，具体如下：最低检测限最低检测限可以因实验所使用的qPCR反应体系、检测靶标和实验条件而异。通常来说，为了获得更高的灵敏度和特异性，建议使用高纯度的核酸提取方法和qPCR试剂盒，以及进行多次重复检测。一些文献报道了在使用血清替代物时检测支原体的最低检测限为10^3到10^4个基因拷贝数/毫升。样本前处理在使用血清替代物处理样本前

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问RAW264.7用LPS造模，时而成功时而失败，找不到原因，细胞都没有问题，大家都是怎么操作的呀

dxy_7wd5i4x0

1.lps质量问题，看有没有过期？2.浓度梯度摸索，以及孵育的时长，像我目前孵育浓度最高1.5微克每毫升，孵育时长最高24h3.比较重要的一点，因为lps刺激raw264.7促进细胞极化，所以细胞培养过程中我选择不用胰酶消化，直接预冷pbs浸泡，细胞刮刀去刮落细胞传代

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问用transwell对巨噬细胞和肺成纤维细胞共培养？

sswei

实验步骤:1、效应细胞接种到transwell小室中，培养24小时。2、靶细胞接种到细胞培养板中，培养24小时。3、过夜培养后，将transwell小室和培养板中的培养液除去，下室加入新的培养液。4、将transwell小室放入细胞培养板中并加入新的培养液，培养48-72小时后进行检测。5、取出transwell小室，吸出细胞培养板中的培养液。6、PBS洗涤细胞培养板两次，4%多聚甲醛固定细胞。7

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问4T1细胞培养，培养瓶内不明区域性黑点，会影响细胞吗？求助！

dxy_8qhx1717

可能是黑胶虫，数量少对细胞影响不大，数量多会使细胞状态极差，不能用于后续实验。黑胶虫一般产生的原因，可能是环境污染，或者试剂污染，或者培养基血清污染。黑胶虫一般极难去除，一旦发现可能会影响整个细胞培养系统，建议全面消毒细胞实验室，购买新细胞。

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问水痘减毒活疫苗病毒裂解的相关问题

土井挞克树

增加裂解液Triton X-100 的浓度

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