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科研学霸天团，48小时有问必答

问【免疫荧光二抗选择问题】

loveliufudan

在进行小鼠组织石蜡切片三色免疫荧光染色时，需要考虑到不同抗体之间的交叉反应问题。以下是一些建议：在选择抗体时，最好选择不同种属的抗体，以减少交叉反应的可能性。例如，您可以选择兔抗小鼠、鼠抗兔、羊抗小鼠等抗体。在进行染色之前，需要进行抗原修复和非特异性结合位点的阻断，以提高染色效果和减少背景信号。您提到的封闭液有山羊血清和BSA，可以根据您所使用的抗体和实验条件进行选择。在选择二抗时，最好选择与一抗

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问求助b细胞培养

sswei

培养条件应该是在pma(5ng/ml)加5％t细胞上清液存在下用辐射的el4b5。

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问transwell细胞侵袭

z流沙z

常用冰的4%多聚甲醛，pbs洗的时候轻柔一点

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问GelMA水凝胶细胞共培养的问题

晴空a

如果培养基含有大量细胞代谢产物，像乳酸和二氧化碳物质会使得培养基变黄。还有就是抗生素、生长因子等化合物被氧化或者分解也会使培养基变黄。

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问小鼠原代心肌细胞提取

土井挞克树

新生大鼠心肌细胞对酶消化极为敏感.消化过度可使肌原纤维出现萎缩，细胞死亡率增加或丧失贴壁能力及搏动能力，你这是消化过度

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问原代细胞多次传代后碱性磷酸酶怎么变化啊

loveliufudan

一般情况下，原代细胞经过多次传代后，其碱性磷酸酶（alkaline phosphatase）活性会逐渐降低。这是因为细胞在不断分裂和增殖的过程中，会逐渐失去其原始状态，包括其特定的表型和功能。此外，不同类型的细胞在多次传代后对碱性磷酸酶的变化也可能不同。有些细胞类型在多次传代后仍然保持较高的碱性磷酸酶活性，而其他细胞类型可能会完全失去这种酶活性。需要注意的是，细胞的传代次数和其碱性磷酸酶活性之间并

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问为什么293T细胞一传代就死了？

z流沙z

293t生长比较快，传代比例应该不止1：2，另外要注意不要吹打太多

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问请问stdev范围多少正常，误差棒太短看不见的图片能用来发sci吗？

loveliufudan

对于数据的标准差，其正常范围取决于实验设计和具体研究领域。在一些实验中，标准差可以很小，例如在高度控制的实验中，标准差可能只有几个百分点。而在其他类型的实验中，标准差可能会很大，甚至可以超过均值的一半以上。在科学研究中，误差棒（error bars）是用于表示数据集合的变化范围和不确定性的重要工具。误差棒的长度取决于标准差的大小，标准差越大，误差棒就越长。如果误差棒太短，可能会掩盖数据变化的重要信

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问Thp1细胞培养的要点

sswei

THP-1细胞培养于含有10%FBS+1%P/S的RPMI-1640培养基中，培养环境为37℃，5%CO2。可以每隔3-4天加一些新鲜的培养基，或直接传代。细胞传代：当细胞密度达到约8x10^5cells/ml左右时，即可进行传代。由于是悬浮细胞，可直接将细胞吸出，离心之后传代。传代最少浓度不应少于1x10^5 cells/ml。注意事项细胞养不好，可能的原因有，THP-1细胞特别依赖细胞浓度，A

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问hela细胞传代一次后不到二十四小时就长满了，请问可以立即传代嘛

秋秋欣欣

可以，下次注意可以多传几瓶，每次这样还是不太好

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问磁珠分选可以选什么细胞？？毕业论文无头绪，请大佬们指点

土井挞克树

细胞都可以，只要是有免疫作用位点，可以孵化抗体就可以

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问PBS出现沉淀，还能用吗？

dxy_mqg1dtg8

如果PBS出现沉淀，可以尝试通过轻轻摇晃或逆流混匀来重新悬浮沉淀，如果能够悬浮则可以继续使用。如果PBS沉淀过多或者无法悬浮，则需要重新制备新的PBS缓冲液。

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问求助大佬们呀

sswei

细胞密度过大，细胞间相互挤压变形。细胞培养用的试剂PH不适合细胞生长，例如偏酸或者偏碱等情况。

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问成骨细胞茜素红染色

loveliufudan

可能原因有以下几点：茜素红染色液的浓度太高或者染色时间太长，导致非钙盐沉积的部位也被染色，影响染色效果和准确性。固定液的浓度或者固定时间不足，导致细胞膜不完整，细胞内钙离子外溢，形成非特异性的钙盐沉积。PBS洗涤液的pH值不合适，导致茜素红与钙离子的复合物不稳定，部分溶解或析出。染色后未及时观察或保存不当，导致染色效果变差或出现污染。为了避免这些问题，你可以参考以下几点建议：根据样品的钙离子含量和

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问细胞提蛋白没有细胞刮用胰酶行不行

sswei

T25培养瓶加200-400ul裂解液，一般加200ul合适。

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问原代兔软骨细胞怎么取

sswei

可以选用1d龄新西兰兔膝关节软骨获取大量软骨细胞，存活率高。

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问生物膜结晶紫染色

sswei

一种原因是由于培养基较热时就密封盖板，导致水蒸气在盖板上凝结。另一种是由于组培室内温度偏高，培养基中水分蒸发导致。一是温度降下来再封口，二是把培养皿倒置。

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问HepG2细胞长不快

sswei

1、培养基可能缺乏细胞生长所需的某种因子通常情况下，当购买细胞，并没有按照ATCC或国内细胞库推荐的方法制备培养基，使用实验使用的培养基来培养细胞。解决方法一般是按照推荐的方法制备培养基，或直接购买培养细胞的培养基。2、支原体、细菌、真菌等污染:虽然培养基中通常添加双抗体(青霉素和链霉素)，但如果无菌操作观念不强，仍有可能造成污染。处理方法:如果有冷冻细胞，可以丢弃污染细胞。当然，丢弃并不是随意的

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问CAR-T细胞总是聚团生长

sswei

一般可以从以下几个方面分析：1、消化的过程可能过于粗暴，吹打太用力，消化太久，消化液太强或有毒性等会导致细胞死亡。细胞死亡后会释放出DNA，缠绕其他细胞，形成黏性的细胞团。2、细胞离心速度过大或时间太长，也容易造成细胞抱团。3、消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难。4、悬浮细胞培养摇瓶、状态不好、老化的细胞，也可能会出现抱团生长的情况（比

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问外源基因进入细胞主要有那些方法？

sswei

不同导入原核受体细胞的方法： ①转化：把以质粒为载体，构建的重组分子导入受体细胞的方法。 ②转导：以噬菌体或真核病毒为载体构建的重组分子导入受体细胞的方法。 ③三亲本杂交：将含有重组DNA分子的供体菌，被转化的受体菌含有辅助菌，在辅助菌作用下，将供体菌导入到受体菌中。不同导入真核受体细胞的方法： ①导入酵母中：对酵母进行转化的两种方法：a.细胞壁在CaCL2或多聚醇作用下，细胞壁具有穿透性，允许外

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