实验问答22,828,601 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问YOCK抑制剂Y27632

loveliufudan

虽然RhoA是ROCK的上游调节因子，但是Y27632也被发现具有一定的抑制RhoA表达的作用，具体原因可能包括以下几点：Y27632对RhoA的转录和翻译过程具有一定的抑制作用，从而减少了RhoA的表达水平。Y27632还能够通过抑制细胞骨架蛋白的重组，降低RhoA的活性，从而降低RhoA信号通路的效应。此外，Y27632还能够影响一系列细胞信号通路的活性，包括PI3K/Akt、MAPK等，从而

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问96孔板中的细胞长满了，还能做药物实验吗（96孔板中细胞长得超级满的那种）

武金亮wu

最好不要，我之前就是长到90%，发现药物对其抑制作用减弱了，OD值也和之前的差距很大。虽然很麻烦还是建议重新铺板，时间把握不好的尽量稀一点。ps不知道你是做什么实验，如有错误请指出。

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问HepG2如何和肝星状细胞共培养？有哪些方法？

Dr_劉医生

HepG2和肝星状细胞的共培养方法有很多种，主要分为间接培养和直接培养。当您将HepG2和肝星状细胞分别培养时，您可以按照以下步骤进行：将HepG2和肝星状细胞分别接种在含有适当培养基的培养皿中。在37℃、5% CO2的恒温培养箱中培养细胞。收集细胞，将它们混合在一起。另一种方法是：将HepG2和肝星状细胞分别接种在含有适当培养基的培养皿中。在37℃、5% CO2的恒温培养箱中培养细胞。收集Hep

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问fresh hormone-deprived medium是什么，与无血清培养基SFM有什么区别？

Dr_劉医生

fresh hormone-deprived medium是指不含激素的培养基，而无血清培养基SFM是指不含血清的培养基。这两种培养基的区别在于，fresh hormone-deprived medium不含激素，而无血清培养基SFM不含血清。

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问脓毒血症细胞模型怎么提取？

Dr_劉医生

脓毒血症细胞模型的提取方法有很多种，其中一种是通过单细胞测序来提取。既往的研究也显示从脓毒症患者提取CD14+的单核细胞，其HLA-DR表达量较低。可以参考一下几篇文章：1、肺炎诱发脓毒血症的脓毒症患者的Treg / Th17，Th1 / Th2和M1 / M2细胞比率。2、早期研究已经证明组织因子-FVII7a在脓毒症相关模型中的关键作用。

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问求助联合药物干预细胞浓度

Dr_劉医生

建议A和B组各设置一个单药+空白的对照组，然后A+B联合组作为实验组，然后观察各组干预浓度的效果，以确定目标浓度

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问哪一种M2巨噬亚群可以降解胶原？

sswei

纤维化模型中，降解细胞外基质胶原应选M2a。

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问生物膜结晶紫染色清洗问题

Topmicro

固定好之后不要正对着生物膜部分冲一般都没问题

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问如何建立耐药细胞系

sswei

取处于对数生长期的肿瘤细胞（汇合度60%-80%），加入起始浓度为低浓度（建议为亲本细胞株的IC50的1/10-1/5）的药物作用24h，弃去培养液，PBS清洗2遍，更换不含药物培养基，细胞恢复生长后，消化传代复以低浓度作用细胞24h，待细胞增殖至正常形态后，重复上述药物冲击，每种浓度冲击6-8次。待细胞在此浓度稳定生长后，提高药物浓度继续培养，药物依次递增浓度加药。药物诱导历时6-8个月，直到细

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问细胞形态

loveliufudan

目测很可能是污染了，MDA-MB-231是一种人类三阴性乳腺癌细胞系，需要注意其易感性较高，容易受到外界污染物的影响。如果您的细胞在第三天出现了很多的飘浮细胞，那么您应该考虑细胞已经出现了污染。

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问帮我看看这是细胞污染吗

huarenqiang5

这是细菌污染了，建议及时处理一下。

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问细胞保种

z流沙z

还行，正常培养，不需要特殊的培养基

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问样本量post-hoc power

loveliufudan

这句话的意思是，卡方检验不能用于确定样本量的大小是否适当。这是因为卡方检验是一种统计方法，其目的是评估观察到的数据与预期数据之间的差异，从而确定变量之间的关系是否显著。在进行卡方检验时，样本大小通常是固定的，而不是根据检验的需求来确定。样本量的大小通常是在研究设计的初期根据研究目的、统计学假设、效应大小、显著性水平和统计功效等因素进行计算的。而对于已有数据的分析，可以根据样本量和效应大小等指标计算

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问关于细胞污染

z流沙z

圆形的好像是细胞不像球菌污染那应该就是支原体污染，可以购买支原体去除剂

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问求助：提的大鼠原代星形胶质细胞形态感觉不太对

z流沙z

5只老鼠分别放5个培养瓶，这个可能是密度太高导致细胞挤在一起

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问黄牛肌肉干细胞后代AKT总蛋白显著下调

z流沙z

细胞培养比较久以后出现老化了，建议还是使用传代次数少的进行实验

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问bv2小胶染色

loveliufudan

如果您在BV2细胞中使用对照染色法进行iNOS和Arg-1染色，并且两者都出现染色阳性的结果，这是符合预期的。iNOS和Arg-1是两个互补的酶，在不同类型的细胞中表达方式也不同。在BV2细胞中，iNOS主要参与一氧化氮（NO）的合成，而Arg-1则参与细胞色氨酸代谢和精氨酸代谢。因此，在炎症反应过程中，BV2细胞中同时表达iNOS和Arg-1也是可能的。总之，如果您的对照染色法显示BV2细胞中i

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问Caco-2细胞（caco2细胞）培养，lps刺激

Topmicro

需要确定一下干预时间，另外浓度是否合理？

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问有大佬能教一下如何调Zstack ，有什么参数能设置吗？调成图二这样的。还是说只能手动调

土井挞克树

Zstack软件可以设置调节立体度和曝光度。然后调节荧光亮度。不是手动调节

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问Calcein释放实验检测细胞毒性T淋巴细胞活性实验-求助

loveliufudan

1.对于T细胞的共培养，一般需要用Beads（例如CD3/CD28 beads）来活化T细胞。活化时间一般为24-48小时，根据具体实验目的和试剂厂家建议来确定。在进行共培养前，需要计数细胞数以确保实验的可重复性和可比性。2.目标细胞使用2000-5000个进行共培养一般是没有问题的，但是具体的细胞数应该根据实验目的和细胞类型来确定。3.自发释放组的荧光值超高可能与实验条件有关，例如细胞密度、温度

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