实验问答22,076,945 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问细胞凋亡检测过程中药物组颗粒数/细胞数达到1/8，颗粒数一万多但图像上细胞非常少，而对照组比值接近1/1，颗粒数同样一万多而图像

sswei

颗粒数过多主要是细胞凋亡后导致凋亡小体过多，需要重新对细胞进行计数。

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问细胞主要分布在对角线，可能是什么原因

huarenqiang5

细胞分布在对角线上可能是死细胞，也可能是双阳性细胞，但是这两种细胞的形状是不一样的，死细胞呈现连续的线型分布，而双阳性细胞群呈现圆形的群体分布，可以从对角线上的细胞群体的形状大致判断细胞的性质。圆形的双阳性细胞群和线型的死细胞群有时相互重合在一起，这时依靠散点图无法区分双阳性细胞和死细胞。死细胞的非特异性荧光强度可以与荧光素产生的荧光强度类似，所以不能根据荧光强度的强弱去区分该荧光

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问各位老师好，正常组细胞坏死占10%-20%可能是什么原因，同样操作的用药组细胞坏死约6%，正常组坏死都偏高

sswei

可能的原因有正常组细胞冻存或复苏过程中损伤；培养液种有毒代谢产物堆积等。

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问各位老师好，请问看药物处理后看细胞的凋亡率是看早凋，晚凋还是总凋亡率？早调和晚凋有什么区别呢

土井挞克树

凋亡率计算是需要看早凋和晚凋的比值，早凋和晚凋的区别是主要是为了区分出细胞是正常凋亡和非正常凋亡

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问wb中分离胶用水封液后胶没有往下缩，而且不像果冻是的，像胶鞋底那种硬，是为什么？

dxyc42u

很可能配制时候各个成分搞错了。

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问Western Blot 一抗孵育4℃过夜，有时间范围吗？时间长度的上限或下限

dxy_mqg1dtg8

Western Blot 一抗孵育的时间应该根据实验需要和一抗的性质来确定，通常需要进行优化。一般来说，一抗孵育的时间范围可以在1小时至过夜之间。如果您需要进行快速检测，可以选择较短的一抗孵育时间；如果您需要检测较弱的蛋白质信号，则可以选择较长的一抗孵育时间。在孵育过程中，可以不断检测蛋白质信号的强度，以确定一抗孵育的最佳时间。需要注意的是，过长的一抗孵育时间可能会导致非特异性结合，从而影响检测结

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问每个杯的时间设置有要求吗？

sswei

可能与仪器工作环境，杯的放置位置正确与否等有关。

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问实验求助|IFN-γ诱导肿瘤细胞PD-L1表达

loveliufudan

如果您的目标是研究药物处理对PD-L1表达的影响，您可以在药物处理期间不再加入IFN-v，以观察药物对PD-L1表达的直接效应。然而，如果您希望模拟特定的生理条件或研究IFN-v与药物处理的相互作用，您可能需要在药物处理期间继续加入IFN-v。

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问提原代污染了吗？

skyye

长梭形的、触角长长的比较像是成纤维细胞。如果是支原体污染的话细胞生长缓慢或基本不生长，镜下很难鉴别，一般需要取上清做PCR才能鉴别是否有支原体污染。另外请问你是提血管内皮细胞还是什么细胞呢？

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问细胞培养过程中出现黑胶虫污染怎么解决

loveliufudan

细胞培养过程中出现黑胶虫污染是一种常见的问题，但可以采取一些措施来解决这个问题： 1. 隔离受污染的细胞：首先，将受污染的细胞与其他未受污染的细胞隔离开来，以防止进一步传播。 2. 清除污染源：检查培养皿、培养瓶、培养基和培养室等，找出可能引起污染的源头。对受污染的培养皿或瓶子进行处理或清洗。 3. 更换培养基：将细胞转移到新的培养基中，确保培养基不被污染源所影响。 4. 清洁培养设备：对培养皿、

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问大佬们求助！在养脑肿瘤细胞，背景呈沙子状，已经复苏好几管了还是这样

sswei

细胞培养己污染，需要重新培养了。

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问槲皮素对细胞的作用

tianalan

DMSO浓度影响呢？我做的就是全是抑制趋势。还有一个设立DMSO等体积对照组的问题。我想问下你的浓度组设立情况。

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问自噬流判断

loveliufudan

LC3-II/1和p62的下调以及AMPK和beclin1的上调提示细胞可能正在经历自噬的激活和执行自噬过程。在自噬过程中，LC3-I会转化为LC3-II，而p62是一种与自噬相关的蛋白质，负责将被自噬降解的蛋白质和细胞器与自噬体结合。因此，LC3-II/1的下调和p62的下调暗示着自噬活动的增加，可能导致了细胞内废弃物的降解和清除。同时，AMPK（AMP-activated protein ki

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问BV2细胞

dxyc42u

看图中有部分细胞已经极化了：。

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问流式分选仪分选并收集带有绿色荧光标记的细胞

dxyc42u

以下是需要注意的地方（1）如何提高分选速度：振荡频率、鞘液压力、喷嘴大小、上样速度-振荡频率越高，分选速度越快；-振荡频率越高，鞘液压力也随之增加；-若要形成稳定液滴，最佳振荡频率：f=V/（4.5d）；-鞘液压力和喷嘴大小一定时，振荡频率相对固定。-上样速度过快，得率会降低，故最佳上样速度=1/undefinedf（2）如何提高分选纯度：-精确设定液滴延迟时间（Drop Delay）：指细胞通过激光检测区到液

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问请教肿瘤细胞成球实验出现黄色球体是什么

loveliufudan

黄色球体的出现可能是由于肿瘤细胞内部脂质的积累，脂质积累可以是由于细胞内脂质代谢异常或脂质包裹的细胞内组分。

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问细胞复苏肿瘤细胞复苏后为什么里面有小黑点杂质

loveliufudan

肿瘤细胞复苏后出现小黑点杂质的原因可能有多种可能性，其中一些常见的解释包括： 1. 细胞碎片：在细胞复苏过程中，一些细胞可能会经历凋亡或破裂，产生碎片。这些碎片可能在细胞复苏后的培养物中存在，呈现为小黑点杂质。 2. 细胞内含物：某些细胞内含物，如细胞器的残余部分、内部膜片段或其他细胞成分的残余，可能在细胞复苏后仍然存在，并形成小黑点杂质。 3. 培养物污染：在细胞复苏和培养的过程中，可能会发生细

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问细胞复苏细胞复苏后为什么有小的杂质

李树堂ZW3H

可能是支原体，加200微升四环素应该就可以了，或者换液培养观察几天再看看，可能会有改善

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问石蜡切片制作时为什么切片组织总有横向裂缝 ?

sswei

做石蜡切片过程中，有裂纹可以考虑以下方面： 1.石蜡包埋时温度设置的比较高，如>70℃，容易导致组织变脆，组织变硬，切片时容易产生裂纹 2.前期的脱水透明部分，浸泡时间久，容易导致组织变脆 3.刀片：有一次切片时组织一直碎，换了新的刀片之后就切出了完整的切片 4.转动手柄的速度：不要太慢，速度要均匀适中，可以多切一些再展片 5.展片的温度：如果组织展片过程中易碎，可以调整一下展片的温度

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问转染vs拯救病毒是什么意思？具体如何操作？

土井挞克树

一种方法是构建病毒的感染性克隆，并以此为模板合成病毒的RNA，通过转染合适的宿主细胞来拯救病毒。另一种方法是通过将病毒的基因组cDNA克隆到质粒载体，并转染易感细胞获得拯救病毒

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