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科研学霸天团，48小时有问必答

问什么是细胞培养技术，细胞培养技术在什么条件下进行？

loveliufudan

细胞培养技术是一种在体外控制细胞生长和繁殖的实验方法。它涉及将细胞从其天然环境中分离出来，并在培养基中提供适当的营养物质和条件，以促进其生长、增殖和维持。细胞培养通常在以下条件下进行： 1. 培养基：使用含有必要营养物质（如氨基酸、糖类、维生素和矿物质）的培养基来提供细胞所需的生长条件。 2. pH和温度：细胞培养需要保持适宜的pH值和温度。通常在37摄氏度下进行，pH值保持在7.2至7.4之间。

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问睾丸支持细胞怎么培养？

loveliufudan

睾丸支持细胞（Sertoli细胞）是一种在睾丸中起支持和调控生精细胞发育的细胞类型。它们可以通过以下步骤进行培养： 1. 提取和分离细胞：从小鼠或其他适合的模型动物的睾丸中提取细胞。这通常涉及灭菌的手术和组织分离技术。 2. 培养基准备：制备适合睾丸支持细胞的培养基。通常使用基本培养基（如DMEM）并添加必要的营养物质、生长因子和血清成分。 3. 接种和培养：将分离的睾丸支持细胞接种到含有培养基的

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问有人用过Sebomed basal medium养SZ95皮脂腺细胞吗？和DMEM养出来有大的区别吗

loveliufudan

Sebomed基础培养基是一种常用的细胞培养基之一，用于支持皮脂腺细胞（如SZ95皮脂腺细胞）的生长和维持。与DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium）相比，Sebomed基础培养基具有一些特定的配方和优势。Sebomed基础培养基是专门为皮脂腺细胞培养而设计的，它包含了与皮脂腺细胞生长和分化相关的重要成分和营养物质。这种培养基通常提供更适合皮脂腺细胞的生长条

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问确定某药物对某贴壁细胞的IC50，应该在什么水平的细胞密度下进行？（cck8或mtt法）

loveliufudan

对于CCK-8或MTT法，常见的细胞密度范围通常是每孔5000到10000个细胞。这个范围通常适用于大多数贴壁细胞，并且可以在培养基中提供适当的营养和生长条件。但是，请记住，具体的细胞密度可能因实验需求、细胞类型和药物特性而有所不同。

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问羊水细胞培养检测染色体时，如何通过观察亮圆细胞的生长状态，判断细胞收获的时机？

秋秋欣欣

培养瓶中可以见有4～6个较大的细胞“克隆”；细胞“克隆”中存在宛如明珠的分裂细胞，有时互相连接，成双成对，能在一个视野中计数10～15个球形细胞；

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问细胞传代多少代以后就不适宜做实验了？

huarenqiang5

一般细胞建议控制在10代以内，原代细胞不超过3代。

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问NKT细胞的详细培养方法？

loveliufudan

NKT细胞培养中，常用的细胞因子包括IL-2（白介素-2）和IL-15（白介素-15），而L-7（Ligand 7）并不是常规使用的细胞因子之一。所以一般情况下，在NKT细胞培养中并不会添加L-7。关于每个细胞因子的添加量和培养周期的长度，会根据实验室中的具体研究需求和细胞株的特性而有所不同。通常情况下，IL-2和IL-15会在培养基中添加，并且其浓度会根据实验目的进行优化。常见的IL-2添加浓度

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问细胞实验用耐药株细胞，动物实验可以不用耐药株用普通株吗（不涉及耐药性实验，本来准备做的，后来决定不做那个药的耐药考察了）

sswei

不同性质的菌珠细胞会对实验结果产生影响。

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问求容易接收case report 的杂志，影响因子不限？

dxyc42u

Medicine 是发表个案报道最多的期刊。审稿速度快，大约1~3个月左右。

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问L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中稳定性怎样？

sswei

L-谷氨酰胺在细胞培养时是比较重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。

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问为什么我的细胞原代培养总是失败？

sswei

1：防污染意识欠缺2：器材灭菌不彻底手术器械混用后，没有进行高温湿热灭菌（121℃/25min以上），因为单纯的紫外照射消毒压根不能排除污染源，另外，打开包装的离心管、EP管、枪头等，超过一周以上未及时重新灭菌，细胞实验最忌讳的就是怕麻烦和懒，一定要勤于清洗和灭菌实验器材。3：原代材料处理不当实验所用细胞原代培养的动物，进入紫外传递箱之前，没有进行75%乙醇浸泡消毒，而且获取相应的组织时，解剖手法

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问Nk细胞培养相关问题

sswei

坚持无菌操作，避免细胞污染和交叉感染。细胞密度要适宜，太低可能导致细胞凋亡，太高则可能造成细胞堆积、难以吸附。培养基的选择要根据实验需要进行，一般包括基础培养基、补充剂等。培养条件要符合细胞生长的需求，如温度、湿度、CO2浓度、培养器等。定期更换培养基，避免老化和积累有害物质。

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问怎么样才能提取小鼠细胞 dna

dxyc42u

操作步骤：（1）收集小鼠细胞，PBS 漂洗3次；（2）将细胞悬浮于500 ul的TNE缓冲液中；（3）加入6 ul20mg/ml蛋白酶K和50ul10%SDS，轻缓摇动；（4）37℃保存1-4小时；（5）加入等体积250ul饱和酚和氯仿，轻摇15-20分钟，1200rpm离心5分钟，用大口径吸管转移上清；（6）用2倍体积的乙醇（室温），轻摇至DNA出现；（7）12000rpm离心10 min，20

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问成骨细胞和破骨细胞共培养

huarenqiang5

诱导成骨成功的mc3t3细胞，可以用正常胰酶消化下来使用。

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问细胞免疫荧光多聚甲醛固定后不染色如何保存？

土井挞克树

4摄氏度放在冰箱内保存就可以了，到时间拿出来检测

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问请公司做数据分析的钱是导师出还是自己出呢？

土井挞克树

导师有钱导师出，导师没钱自己出

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问本来投的SCI，在反复修稿过程中被转到了另一个期刊，到了最后让交版面费时才发现这是一个前年才被踢出SCI的期刊，有遇到过的吗？

土井挞克树

这个你在投稿前期最好查询好，不然录用后就只能撤稿了

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问现在已经毕业工作一年，发文章想用读研医院留下的数据，医院署名到工作单位，可以吗？

loveliufudan

在使用毕业时在研究医院留下的数据并发表文章时，通常需要仔细考虑署名和机构归属的问题。以下是一些建议： 1. 了解数据的归属权：首先，确定数据的归属权。如果数据属于研究医院，你可能需要联系医院或数据的责任人，了解是否可以使用这些数据，并确保遵守医院的相关政策和规定。 2. 尊重医院的权益：在使用医院数据时，确保医院的权益得到尊重。这可以包括在文章中署名医院或提及医院作为数据来源。与医院沟通，了解他们

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问请问大家怎么做好Transwell分离培养?

土井挞克树

1.细胞悬液 200µl 加入 Transwell 小室(肿瘤细胞数目需要摸浓度,从 2 万,5 万,10 万)。2.24 孔板下室一般加入 600µl 含 15%FBS 的培养基,特别注意的是,下层培养液和小室间常会有气泡产生,一旦产生气泡,下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失。在种板的时候要特别留心,一旦出现气泡,要将小室提起,去除气泡,再将小室放进培养板。3.养细胞:常规培养 12-48h(主

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问HaCat角质形成细胞系要如何购买？

dxy_xextz7w2

可以咨询一下各大公司以及各大公司的试剂代理商

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