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科研学霸天团，48小时有问必答

问悬浮细胞怎么做呢？

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问细胞培养为什么会出现黑胶虫（第一次遇到）？

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问请问划痕实验应该何时加入药物处理条件？

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问复苏后的干细胞是 1 代细胞吗？

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问关于软骨细胞

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问平板克隆检测放化疗敏感性

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问划痕实验

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问INS-1细胞做高糖诱导凋亡实验

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问划痕实验需要划几条啊？

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问细胞免疫荧光步骤需要注意的问题？

我是金博士

具体步骤是：1、细胞爬片2、4%多聚甲醛固定10 min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)3、PBS漂洗5 min4、0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)5、PBS漂洗2次，每次5 min6、1%BSA封闭30 min7、加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2 h8、PBS漂洗2次，每次5 min9、加入1%BSA稀释的二抗，于37℃杂交1 h10、PBS漂

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问流式细胞仪标本的制备的具体步骤是什么？

我是金博士

1.收集细胞。上皮细胞需要蛋白酶消化，然后收集。加PBS或者流式洗液 1ml ，振荡，1400rpm 离心5min ，弃上清。2.染表型悬浮细胞于100ul体积，细胞浓度约为或者小于 1X10^6,加入流式染色抗体。按照说明书用量或者减半（根据经验）。分出一管作为同型3. 4度，避光30min，用PBS 洗一遍，1400rpm 离心5min ，弃上清。4. 破膜破膜剂以BD pharming

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问神经胶质细胞经摇床振摇纯化18h，星形胶质细胞没了

新叶FJ31

请问一下你的分离步骤

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问苏木素复染后还用盐酸酒精分化吗？

tao0129

1.盐酸酒精分化的目的：一方面是分色；另一方面是减弱过强的苏木素核染色。所以你若把握好苏木素着色，也可不分化。2.分化时间不能过长，否则阳性着色也褪色。

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问悬浮细胞复苏后培养 2.3 天会出现小黑点会是什么原因？

云天昊

保存的细胞有问题吧

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问干扰多久再流式上机啊

鹏21PE

1、通过荧光定量或WB检测确定siRNA是否干扰成功及其时间点，干扰效果一般根据siRNA转染剂量而有所差别； 2、根据确定的时间点，添加凋亡诱导剂，进行流式检测。

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问集落是检测什么的呢？检测细胞多少嘛？

风Free001

将血细胞置软琼脂培养基进行培养形成的细胞集落数。集落形成单位的数量即为干细胞数量的量，因此是一种判定造血干细胞等分化能力的试验。

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问HO-8910 和术中取材的瘤细胞有什么区别？

云天昊

这个二者是不一样的，从DNA水平，患者身上获得的样本，不一定能稳定传代

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问见不到荧光是为什么？

zhangwan8686

主要问题是抗体浓度和一抗二抗结合不够，尝试提高二抗浓度，延长二抗反应时间，另外，一抗可以做梯度实验，找寻一抗二抗最佳比例

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问传代培养喉癌细胞有哪些注意事项？染菌好多次了，求助

alaling

1.首先做一个培养基的培养，看看无任何条件下是否有菌生长，以此确定是你的环境（包括超净台、培养器皿、培养基等等等等）是否有问题2.如果培养基有菌生长，从培养环境开始找问题，比如培养基是不是被污染，用的器皿是不是被污染，超净台是不是已经不达标（这个是最惨的……）等等3.如果培养基没有菌生长，可以从自己的操作上找找原因，是不是操作规范。

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问细胞冻存和复苏实验相关问题

lchoxy520

800转，3min, 离心管里加5-8ml培养基。

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