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科研学霸天团，48小时有问必答

问密度梯度离心里 Conc.6% 是什很么意思？

clujyh430

分离液的浓度为6%,这个是以前的产品，sigma有最新的

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问请问用 6 孔板做划痕实验一般划几行？为什么要 marker 笔在底部画直线，会对拍照造成影响吗？

兵兵兵兵小

在底部画线是为了划痕时候能有一个大概得参考，拍照时候用酒精棉擦掉就好。

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问是否罗氏的试剂盒并不需要后面的脱水、透明步骤？

tao0129

罗氏凋亡试剂盒有两种方案。1 一种荧光显微镜观察和一种DAB显色。因为他用的是荧光素标记的dUTP，若用荧光显微镜观察，那后面的酶标记抗荧光素抗体就不要孵育了，也不要脱蜡透明，只要用抗荧光催灭封片液封片即可。2 而后者还是需要进行POD-抗荧光素抗体孵育，最后还要进行脱蜡、透明和中性树胶封片。

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问肿瘤细胞诱导血管生成模型，有相关中外文文献么？

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问TUNEL 法检测细胞凋亡可以直接在孔板上做吗？

fly620

做成细胞爬片后，染色，避光孵育会比较方便，六孔板中的细胞不能用油镜观察。

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问悬浮细胞怎么做呢？

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问细胞培养为什么会出现黑胶虫（第一次遇到）？

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问请问划痕实验应该何时加入药物处理条件？

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问复苏后的干细胞是 1 代细胞吗？

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问关于软骨细胞

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问平板克隆检测放化疗敏感性

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问划痕实验

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问INS-1细胞做高糖诱导凋亡实验

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问划痕实验需要划几条啊？

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问细胞免疫荧光步骤需要注意的问题？

我是金博士

具体步骤是：1、细胞爬片2、4%多聚甲醛固定10 min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)3、PBS漂洗5 min4、0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)5、PBS漂洗2次，每次5 min6、1%BSA封闭30 min7、加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2 h8、PBS漂洗2次，每次5 min9、加入1%BSA稀释的二抗，于37℃杂交1 h10、PBS漂

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问流式细胞仪标本的制备的具体步骤是什么？

我是金博士

1.收集细胞。上皮细胞需要蛋白酶消化，然后收集。加PBS或者流式洗液 1ml ，振荡，1400rpm 离心5min ，弃上清。2.染表型悬浮细胞于100ul体积，细胞浓度约为或者小于 1X10^6,加入流式染色抗体。按照说明书用量或者减半（根据经验）。分出一管作为同型3. 4度，避光30min，用PBS 洗一遍，1400rpm 离心5min ，弃上清。4. 破膜破膜剂以BD pharming

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问神经胶质细胞经摇床振摇纯化18h，星形胶质细胞没了

新叶FJ31

请问一下你的分离步骤

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问苏木素复染后还用盐酸酒精分化吗？

tao0129

1.盐酸酒精分化的目的：一方面是分色；另一方面是减弱过强的苏木素核染色。所以你若把握好苏木素着色，也可不分化。2.分化时间不能过长，否则阳性着色也褪色。

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问悬浮细胞复苏后培养 2.3 天会出现小黑点会是什么原因？

云天昊

保存的细胞有问题吧

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问干扰多久再流式上机啊

鹏21PE

1、通过荧光定量或WB检测确定siRNA是否干扰成功及其时间点，干扰效果一般根据siRNA转染剂量而有所差别； 2、根据确定的时间点，添加凋亡诱导剂，进行流式检测。

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