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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
半贴壁细胞做免疫荧光,该怎么处理呢?
jingle8713
收集细胞,用PBS洗涤,然后加入血清重悬。载玻片要用酒精泡,然后清水浸泡,烤干之后用多聚赖氨酸浸泡,烤干后,将细胞悬液涂在载玻片上面。室温晾干,待片子干了之后就可以继续往下走了,固定,通透等
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问
硫酸镍加入 PBS 后一直不溶解是为什么呢?
脂肪鱼
跟酸碱度有关
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问
神经瘤细胞能直接放液氮罐冻存吗?
angell_202
神经瘤细胞不能冻液氮罐吗?为什么?如果是-80度直接放液氮罐,如果现准备冻存,按冻存步骤来。
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问
细胞密度对细胞周期有影响吗?
菜问喵
而且尤其是凋亡检测,如果细胞太满影响会很大
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问
贝类的血细胞能否直接用试剂盒?
苏格兰白草莓
申请个试用装试试就知道了,反正实验材料还是很好获得的吧
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问
为什么要铺两层浓度不同的琼脂呢?
塞舌尔墨宝
底层浓度高提供营养同时防止细胞贴壁,上层浓度低有稀疏的孔径也可提供营养使肿瘤细胞形成细胞球,同时可加入其他药物或细胞因子设置不同对照,
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问
细胞传代消化时间过长,消化不下来,这样会对细胞有损害吗?
zyj0630
消化时间过长对细胞的呼吸酶和膜蛋白有损害作用,可以通过拍打细胞培养瓶的物理手段来缩短消化时间。但是个人认为你描述的情况,即本来这种细胞消化时间没那么长,培养时间过长再传代时消化时间变长,这个细胞的有些性质可能已经发生变化了……后续实验中使用不是很好。
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问
我用多聚赖氨酸包被了,还是脱片很严重,请问有好的解决方法吗?
丁小燕
只有在用PBS洗涤时要轻柔,每一步都要轻柔才行!
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问
POD做细胞凋亡,DAB显色后,需要用苏木素复染阴性细胞核吗?
wendyk
用苏木精复染一下结果会更加清晰,但要注意复染的时间不要过长,能够看清楚细胞核的轮廓即可,染的过深可能会覆盖你的阳性信号。至于DAB你直接买显色试剂盒即可,中山和博士德都有,直接买来用就可以了。自己配的染色效果可能还不好。
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问
鼻咽癌 CNE2 细胞培养过程中形态为啥会变(梭型变成多边形)?
dengchch
其实CNE2也不是完全是梭形吧。有的是梭形,有的多边形,尤其是像CNE2这种细胞。我们研究部有挑过CNE2细胞的单克隆,发现一些克隆是主要呈梭形,一些则呈现多边形或不规则形状,梭形的细胞一般恶性较强。所以CNE2可以认为是一个混杂了多种类型细胞的细胞系,这其实也符合癌症细胞异质性的理论。我觉得只要细胞状态正常,性状与之前基本一致,确定没有其它细胞污染,就可以用来做实验。
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问
冻存的细胞可以先在-80°冰箱放几天再移入液氮吗?
我是金博士
理论上市不太有影响的,最好还是按要求哦
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问
大鼠平滑肌细胞培养,细胞不贴壁了是什么原因?
ptosir
你的细胞出现了比较明显的形态变化,有些变得更像上皮组织细胞了,如果不是细胞老化或细胞株本身有问题的因素,可能还是培养条件和培养方法的问题。说说你的具体培养方法吧
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问
如何动态观察细胞的生长情况
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问
如何控制胰酶的使用程度?
我是金博士
你用多大浓度的酶,哪个公司的?均有差异的。要自己摸索,我的细胞0.25%胰酶sigma消化20分钟都没有问题的。
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问
四唑盐(MTT)比色实验加液量如何选择?
我是金博士
不需要完全照搬文献和书本的,那都是经验值。实际操作,每个人手感不一样,你觉得加10微升,感觉效果还可以,那就用这个值,最终都是为了实验出结果。另外这个问题真不算啥问题,请认真对待每一次提问机会哦。
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问
细胞划痕试验的第 3 步是否要去除培养基?
yiyao111
划痕前是不倒培养基的,划痕后再倒掉培养基加PBS清洗后加吴学谦培养基;细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。因此是整个培养皿都加培养基的,观察部位是划痕而已
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问
哪里可以买到细胞侵袭实验(划痕实验)所用的放在六孔板里的十字形架子?
yus_us
我知道!不就是ibidi的耗材嘛~有2种哦,一种是伤口愈合插件,一种是4孔插件/4孔插件培养皿。
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问
求问骨髓间充质干细胞培养方法?
我是金博士
按1-2×1undefined5cm2密度接种于25cm2培养瓶中(内有含10%FCS的L-DMEM培养基),于37℃、5%CO2、95%湿度培养箱中原代培养,24小时后首次换液,弃去造血干细胞等非贴壁细胞,以后每2-3天换液1次。当细胞达到80%-90%融合时,用0.25%胰蛋白酶(0.1ml/cm2)消化1-3min,镜下观察细胞变圆、间隙变宽、少量细胞悬浮时,胎牛血清终止反应,按1传2-3比例(1×1undefined
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问
固定在玻片上的细胞在保存后能否再用?
tao0129
如需要,可将有固定化细胞的玻片放在70%的乙醇中,-20℃保存2周。
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问
如何选择哪种荧光标记的抗体呢?
snowyca
这个你要根据你们实验室的流式细胞仪所能检测的荧光波长范围决定的。具然后你可以根据这个网站,http://www.gotofcm.com/Web2004V2/techinfoview.asp?id=518,选择你们的机器所能检测的荧光。多个标记染色,要注意:所选的不同荧光,其波长距离要越大越好,否则荧光波长重叠会导致一定的假阴性或假阳性
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