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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
C2C12细胞分化的时候每次肌管分化的都不是很好,而且方向很杂乱,是什么问题啊?然后分化培养基中马血清浓度怎么选择啊各位大佬?
bamboopiggy
将1×105个细胞接种于6孔板,待细胞密度达80-90%时开始更换为成肌肉诱导培养基:含2%马血清、10µg/ml胰岛素的DMEM培养基,隔天换液,于诱导后5天,可见细胞分化成多核的肌纤维--这是我师姐用的方法。
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问
细胞传代培养的操作步骤和注意事项?
摸鱼第一名
DMSO是肯定要去除的,其实问题就是DMSO该怎么处理,主要有两种处理方式,一种是加多倍体积的完全培养基稀释,目的是减少再次离心对细胞的影响。另一种就是漂洗后再次离心,目的是尽可能去除DMSO。感觉我附近前者使用较多。
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问
细胞贴壁和什么有关?为啥细胞不贴壁呢?如何促进细胞贴壁?
bamboopiggy
这个和细胞的状态有很大关系,你可以弄点促贴壁试剂,先处理一下你的孔板,再放细胞
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问
蛋白表达量不高是什么原因?
Topmicro
蛋白表达量不高的原因有很多,比如表达用载体是否合理?培养液是否需要优化?
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问
活久见系列:细胞发霉啦
dxy_gwrp7ndq
灭菌时间长不一定就彻底,还得看你的灭菌锅效率高不高,还有可能你培养基刚出锅就又污染了,培养基的放置环境很重要,培养瓶的选择也很重要
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问
巨噬细胞RAW264.7超难养,说好养的多半是极化了都不知道,请教各位从实验仪器到细胞培养,传代,铺板一系列问题?跪谢了
wwwwhc
一般可以用细胞培养皿🧫。传代可以用细胞刮刀把细胞刮下来,离心,换新培育基,再轻轻吹打散,传代到新细胞皿。铺板的按需要的浓度稀释后,中板即可。
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问
HUVEC 复苏后,传到三代以后整批污染?
dxy_gwrp7ndq
可能的污染有支原体、衣原体和黑胶虫,出现黑胶虫,这种小黑点一样的东西是可以在局部范围内移动的,而且最开始不会影响细胞状态,长多了培养基变浑浊,细胞死亡。值得一提的是这三种污染都不能独立存在,必须有细胞参与,所以继续培养的无菌实验不能排除这三种的可能性。HUVEC既然是取原代细胞,很有可能会带有这样的污染,尤其是像衣原体和黑胶虫这样在细胞内寄生的污染。
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问
关于细胞传代的问题?
bamboopiggy
六代,因为可传代数,指的是细胞总共可以传多少代,你可以在4代的时候,多冻点,每次复苏只能用6代。
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问
大神们,请问这是真菌污染吗
未来9
感觉不像是污染,有点像细胞成团了
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问
细胞培养有一个团块,是污染吗
bamboopiggy
不是污染,是你细胞密度太大了,没有传代,形成的细胞团,直接吸出来就可以
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问
细胞培养时怀疑是支原体污染
bamboopiggy
支原体用显微镜是看不到的,用pcr的方法可以检测,你可从网上搜搜引物。
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问
复苏第三天的PC12细胞,请问这是染菌了吗?
bamboopiggy
是你的血清不好,细胞状态差,分泌的颗粒,没有染菌
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问
为什么我的细胞会长成这样一条线,求助!
bamboopiggy
因为你在操作过程中,把皿底划伤了,所以沿着你划的线长
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问
细胞培养铺96孔板时老是不均匀
bamboopiggy
96孔板没法晃匀的,你要在铺之前,混匀,铺进去以后不要在动了
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问
淋巴细胞培养一般选用哪种培养液
未来9
可用作淋巴细胞染色体培养的培养液很 多,各实验室的使用情况也略有所异
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问
请问下大家用流式细胞仪时候有没有这种情况呀,我第一遍采集是这样,后面震荡重新采集又正常了
bamboopiggy
上流式第一步就是要成单细胞悬液,否则什么样的结果都可能出来
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问
请问下培养液第一次和第二次配的颜色不一样 还能用嘛?右边是第一次配的左边是第二次配的
异乡人hyq
应该可以用的,估计与高温灭菌产生少量碳化有关。
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问
怎么判断蛋白质是否被胰蛋白酶水解掉了呢,水解完全形成肽,所有作用位点都能保证切开吗?求老师指导
bamboopiggy
这个你最好做个时间梯度,或者找你买胰酶的公司问一下他们的检测结果
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问
fadu肿瘤细胞(培养皿养)在培养箱外,多久时间会对细胞有影响。
大草原的小灰驴
“培养箱外”这个概念太模糊了吧?需要根据南北方气候差别,实验室具体温湿度以及无菌情况等综合判断。建议您没有确定是否环境因素会影响了细胞状态的情况下,谨慎使用这部分细胞进行下一步实验,以免难以分析结果和可能存在的问题。
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问
需要提取动物细胞RNA但是没有裂解液怎么办
大草原的小灰驴
可以直接采购相应的RNA提取液,或者在网上搜索您需要的动物细胞RNA提取液的配制方法,然后购买试剂自己配制,PS请注意保存条件哦。可以预试验或者采用阳性对照保证实验过程。
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