实验问答22,051,322 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问如何成功高效的富集聚糖和糖肽以完成糖蛋白分析？

Eason老歌迷

通常使用氨基或者酰胺基柱等极性基团小柱来进行富集。使用MonoSpin Amide可以富集酸性，中性和碱性化合物。通过使用MonoSpin形式整体硅胶小柱。

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问各位师姐师兄细胞传代冻存时间是怎样的？

申东熙老伯

冻存时间？意思是冻多久吗？如果是-80的话，细胞冻个一年第二年就不太行了，放在液氮可以放很久。

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问请问细胞长满一个T25瓶时，大概能铺几个6孔板，使每个6孔板的孔中达到合适的试验细胞密度？约每毫升10的5次方个细胞？

Eason老歌迷

一个T25的细胞瓶相当于6个培养板。铺6孔板得看接种密度和铺几块板，如接种密度为每毫升10的5次方，每孔加2毫升，一个25平方厘米的培养瓶可铺4块6孔板。

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问原代神经元培养过程中聚团脱落是为何

申东熙老伯

贴壁不牢是一种可能，是因为细胞污染。操作过程注意一下。再就是可以细胞放到培养皿的时候可以少加点培养基，在培养箱培养个三十分钟等细胞完全贴壁再加足培养基。

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问过滤器膜是怎么选择的呢？

Eason老歌迷

首先要考虑化学相容性，即滤膜是否耐酸、碱、有机溶剂等。常用的微孔滤膜一般是圆片滤膜，比如25mm圆片微孔滤膜，可以配合针头滤器连接注射器使用。47mm圆片微孔滤膜，可以使用换膜滤器，布氏漏斗、压力容器等配合真空泵，

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问我细胞传代不需要离心，只需要吹打成细胞悬液之后弃去部分液体，补加培养液就可以，操作很简单我步骤都是对的但是为什么我细胞状态一直？

Eason老歌迷

可能有几个原因，一个是你的传代时机选的不好，容易细胞老化。二是你的培养基缺少某些成分，或者是ph值不对。或者是你的胰酶消化过度。

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问最近养细胞总是出现霉菌污染，换了培养基，重新复苏还是会有，大概是什么原因呢？

秋秋欣欣

环境有问题，孵箱以及培养房都灭菌

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问培养瓶是用密封盖好，还是用透气盖好？

Eason老歌迷

各有好处，其实都差不多。密封盖是一次成形不带内垫,常用于密闭培养,可保证其密闭性。透气盖的话，瓶盖带有0.2μm疏水滤膜,提供无菌气体交换,减少污染的风险.常用于开放培养,推荐用于CO2培养箱培养,尤其适用于需要长期培养的实验。

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问细胞培养过程中出现碎片如何处理？

Eason老歌迷

我比较常用的几种方法一个是稀释法。细胞稀释后还能增殖，会越来越多，而细胞碎片相应地会越来越少。还有就是自然沉降法。将细胞悬液移到离心管中，等细胞大部分下沉时，可将上液吸弃，再加入培养液悬浮细胞，此方法可反复使用，同时每次可显微镜下观察是否符合你的要求。

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问复苏后应不应该立马去除掉DMSO?

Eason老歌迷

肯定的啊。细胞复苏后是需要立即离心去DMSO，这样可减少DMSO对细胞的损害，DMSO在常温下对细胞的毒性作用较大。

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问为什么将质粒转化到感受态细胞中，培养基培养后再提取质粒?

balalaLy

质粒转导进感受态后可以随着感受态细胞的增殖质粒得到复制扩增

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问原代神经元培养过程中聚团脱落是为何

Eason老歌迷

可能有多种原因：1.消化不完全，或消化时间不够，都会出现聚团的现象。2、有些细胞就是有相互聚集的特性，这个很难解释，即使吹打均匀，细胞在贴壁时候也还是会聚集在一起。你参考一下和你培养相同细胞的朋友，看看他们是否也是这种情况。3.接种密度过高，稍微降低密度试试。4.瓶子没洗干净。换洗的培养瓶试试。

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问蛋白质壳聚糖溶解度

Eason老歌迷

可以加壳聚糖水解酶，这就不可以避免它的干扰。

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问[求助]bv2细胞的状态鉴别

Eason老歌迷

你这明显是细胞老化死亡碎片，建议一个是掌握好细胞传代时机，不然它很容易老化。第二个培养基要合适，ph值不合适，细胞很容易长不好。

2 回答1135 围观

问请问收到细胞株以后开始实验之前该如何保存？

bamboopiggy

看是干冰或液氮运送的冻存细胞还是放到培养瓶里的活细胞，如果是冻存的细胞，且液氮或干冰还在，细胞没有化的话，可以直接冻存保存。如果是培养瓶给的活细胞的话，要把培养瓶内的培养基倒出来，留10ml，放培养箱培养至少6个小时，最好24小时后，常规冻存和传代就可以。

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问求助|TLR抑制剂（TAK-242）和激动剂（CRX-527）的用法

天一湖医者

TLR抑制剂（TAK-242）常用剂量为0.5mg/kg。激动剂（CRX-527）常用剂量为5-10ug/kg

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问变异链球菌究竟是好氧菌还是厌氧菌？为什么文献里和菌种购买网站不一样？

天一湖医者

一般来说，变异链球菌属于厌氧菌。

2 回答1803 围观

问细胞周围的小亮点是啥

bamboopiggy

那些小亮点可能是细胞碎片，但是我实在看不清楚到底是什么样子，如果细胞增殖速度变慢了，可能是支原体污染。

3 回答2070 围观

问求助红细胞膜包载药物

Eason老歌迷

那你就找一个水溶剂或者是有机溶剂但是不溶解细胞膜的试剂去洗脱药物。

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问求助：皮质酮损伤细胞造抑郁症模型，皮质酮应该怎么溶啊？

秋秋欣欣

先用促溶剂后，再加定溶剂：因为我们的实验中用到了DMSO（二甲基亚砜），它是一种促溶剂，所以我们在溶解皮质酮时，先用少量的DMSO（也就几滴）使皮质酮微溶，再加其他试剂（比如d-Hanks、生理盐水、无水乙醇（可能有影响）等）定容配制皮质酮溶液。

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