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壁细胞收集是刮下来好还是胰酶消化好?
天一湖医者
肯定用胰酶消化好,若直接刮可能对细胞造成伤害,影响传代培养,
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问
求助:用ELISA检测细胞饥饿不同时间点酪蛋白的增加量怎么计算?增量如何变化?
Eason老歌迷
elisa检测最重要的是就是数据处理了。1. ELISA的样本通常要设置1~2个复孔进行检测,分别求出标准品、实验组样本的吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的20%。2. 样本的OD(吸光度)平均值要减去标准品浓度为0时的OD平均值。3. 建立标准曲线:在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线(X轴上为标准品浓度,Y轴为对应的OD值)。推荐使用origin软件。
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问
WB提取蛋白后,样本要如何保存
whilt-shirt
提完蛋白后一部分煮好放-20,一个月内有效,剩下未煮的直接放-80,半年内有效
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问
提取细胞蛋白时,浓度低如何解决
whilt-shirt
100mm的dish是可以加400-600ul的裂解液的,是不是细胞没刮导致浓度比较低
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问
293t细胞裂解液的选择
Eason老歌迷
用sds配吗?150 mM NaCL+ 1% NP-40 (去垢剂) + 0.1% SDS (去垢剂)+2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)+2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)或1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)+1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)+1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)
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问
磁珠偶联抗体时发现抗体有析出,颗粒样,最后信号偏低怎么办
Eason老歌迷
注意反应体系浓度,说简单点就是反应体积大点,蛋白浓度不要太高,太高也容易出现沉淀,况可能和静电有关。
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问
求助:请问细胞实验中,取不同时间点进行细胞增殖的测定,其中时间点0h是什么意思?
汤姆卜丽波
对。就是药物刚加进去就测,相当于空白对照之外的一个对照,为了做曲线用的
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问
不同酪蛋白酶联免疫试剂盒,除了标准品不同外,α和β酪蛋白试剂盒中其他试剂可共用吗
whilt-shirt
理论上是可以共用的,但是要看这些试剂是否一样,最好混一起后再用
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问
细胞生物学问题
whilt-shirt
你这种情况可以试一下胰酶,或许会有效果
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问
请教各位大神,在细胞实验里,怎么确定肿瘤细胞表面的受体和和它的中和抗体发生反应,
Eason老歌迷
最近在看这方面的文章,抗药抗体中的中和抗体能够通过直接与药物作用结合位点结合,或者通过空间位阻的作用,使药物失去与其靶点结合的能力,从而封闭、中和药物的治疗活性。免疫原性检测、评价可以做到。
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问
CCK8实验
汤姆卜丽波
如果确实经费紧缺,比如我们。。。那也可以
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问
提蛋白加RIPA后泡沫很多?
汤姆卜丽波
吹打的时候注意不打完这样泡沫就会少很多
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问
PBS灭菌后可以放多久?
whilt-shirt
灭菌后要及时封口,理论上1个月没啥问题
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问
复苏了一瓶caco2细胞,长得很慢是正常的吗?我用的是DMEM高糖培养基➕10%的血清
Eason老歌迷
当然不正常了!caco-2细胞比较难消化,如果不消化成单个细胞就会长不好,建议用分步消化,用胰酶消化下来一些就移去离心管再加胰酶消化直到完全消化下来。
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问
帮忙看一下这个细胞是怎么了,新复苏的细胞突然长出来这种乳白色凸起的点,这是咋了?
whilt-shirt
有可能是污染了,建议降培养箱重新灭菌后再试试
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问
请问用CCK-8测定细胞增殖率过程中,饥饿处理后加入药物进而检测添加药物后不同时间点的细胞增殖情况,饥饿点如何确定?
bamboopiggy
饥饿的时间点取决于你什么时间饥饿,什么时间加药物,需要根据你的药物来确定。
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问
细胞培养,求问是不是黑胶虫污染
balalaLy
有污染的话细胞内外都会有黑点,如果只是细胞内有,就应该是细胞状态不好,消化过久或者老化
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问
求助 细胞培养
Eason老歌迷
不是细胞污染,我感觉像是一层死细胞。
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问
PC12
汤姆卜丽波
这个你好好调一下倍镜,我感觉像是没调对,也可能是细胞残骸
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问
颗粒细胞
Eason老歌迷
如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消化。3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,
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