实验问答22,467,146 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

问有大佬知道这是染了什么菌吗？

bamboopiggy

是真菌，不要在细胞间打开培养皿的盖子，拿出到外面hood里，加入84做无菌化处理

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问请问有人做snu387过表达转染用潮霉素的吗？急求一个药筛浓度参考，谢谢各位大神

bamboopiggy

我们的常用浓度是：hygromycin终浓度为80-160微克每毫升，你可以先加一个80，一个160试试，哪个死的多，但是能剩下一部分细胞用哪个。

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问hepg2细胞形态及状态

dxy_epq4wjp9

麻烦各位细胞专家看一看，我养的hepg2，第一张是周日晚上拍摄，第二张周五上午拍摄，中间就隔了周六一天，为什么细胞形态会发生这么大的改变

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问求助：无血清培养基中本身含有酪蛋白吗？

你好几和户

一般没有酪蛋白的，可能有如纤连蛋白（FN）、层粘连蛋白（LN）这些。

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问HepG2细胞做cck8

bamboopiggy

可以考虑换用mtt试试，cck8如果你加的药物有强氧化性会和cck8 起反应的。

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问求助！HepG2.2.15细胞怎么养

bamboopiggy

hepG2.2.15你按照普通细胞养就行，dmem高糖，10%的fbs，1%的双抗。就是血清选好点的。

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问【求助】拟南芥侵染后，种子筛选技巧

Eason老歌迷

我在实验室如果在培养基上点，一般用灭过菌的牙签，将牙签蘸一下培养基，就会有粘性，可以一粒一粒点种子，至于怎么将拟南芥点整齐，一般在培养皿下面垫一张划着直线的滤纸，沿着直线点就可以了。蓝色枪头一般用在将种子直接点在基质上。

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问寻求帮助!slot blot

Eason老歌迷

我们是用凝胶成像仪，你可以试一试。

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问请教：B16细胞的传代

dxy_l67kvfd7

消化后直接传代就可以，消化过头或者冻存才需要离心

4 回答341 围观

问请问有正常的肝细胞系么？查到的chang liver和L-02 都被hela污染了，而lx-2 是肝星状细胞系，不是上皮细胞系。

Eason老歌迷

miha cell，你可以试试这个。

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问玉米籽粒GUS染色，为什么阴性对照也被染成蓝色？

Eason老歌迷

很常见，某些带有GUS但无驱动GUS启动子的空载体，如pCAMBIA系列的某些载体，可能会出现以上情形。这是由于驱动选择标记基因的35S启动子的增强子可在一定程度上远程地调节GUS的表达，这在CAMBIA网站上也有提醒说明。或者，材料被某些菌污染了，菌的类GUS基因表达了，可考虑使用含有植物内含子的GUS基因载体。

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问bv细胞这个形态是活化了吗

麻黄连翘赤小豆

这个图就是可以看到触角了，就是极化状态，

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问冰冻切片贴片、冰晶等问题

麻黄连翘赤小豆

包埋剂挤下去的时候减少气泡，还有组织在之前用蔗糖脱水要足够时间可以减少水分减少冰晶

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问MCF7表不表达NKG2DL呀？

bamboopiggy

The NKG2DL expression levels of seven human BC cell lines (BCap37, MDA-MB-231, Hs 578T, MCF-7, SK-BR-3, MDA-MB-468 and BT-474) ，你直接看Silencing NKG2D ligand-targeting miRNAs enhances natural killer cell

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问测组织匀浆中的ROS，空白对照的荧光甚至超过了实验组

balalaLy

以前我们课题组也用过这个牌子的，会出现这种情况，做多几次，确保不要出现实验过程操作上对细胞的影响

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问细胞免疫荧光实验重复问题

bamboopiggy

1.最好单独染一个孔，然后再重复两次，因为你一次做三个，可能三个都是一个样子，要错就都错了。2，对，你说的对，三次取平均3，你用pfa固定细胞，感觉是要做胞内荧光，但是不建议你保存那么长时间，还是回来再继续做吧。

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问那怎么样冻存细胞才能保证细胞能正常复苏，不至于冻存死亡呢？

麻黄连翘赤小豆

在冻存过程中减少冰晶的产生，这样细胞就不会刺破，根据这个目的进行冻存方法的改进。有些细胞是95血清5培养基，还有现成的冻存液都是可以用

4 回答660 围观

问MRC-5细胞复苏后状态极差，比例是5:4:1，是说明书推荐比例，有必要提高血清浓度吗？

whilt-shirt

有可能是没冻好，建议更换成品的冻存液

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问求流式检测胞内抗原时打孔液的配方？

你好几和户

加⼊10%Triton X 100，（破膜⽤）；加⼊1 mmol/L氯化钙，（问题所在），吹打均匀，孵育1~10min，测定荧光即Fmax值。

4 回答623 围观

问低内毒素质粒抽提如何降低RNA污染

Eason老歌迷

冬天提取质粒DNA的时候，直接把快速质粒DNA小量试剂盒放到恒温箱里温育（反正Buffer II冬天会结晶，就是需要提前温育的）到37℃后再使用。把实验室的空调开高一些，等温度升高后再做实验（记得有一年实验室一直不能重复出用户投诉的RNA污染结果，现在怀疑和空调温度打得太高了也有一定的关系）。不要急着做实验，把养好的细菌凉一凉再做（等个4~5个小时，因为细菌在不良的生长环境下会减少新陈代谢，RNA

3 回答425 围观

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