各路神仙保佑
各位前辈们好,我最近做实验遇到了一件怪事,去年我用pET-28a质粒构建了一个过表达载体,转化到BL21菌株制备的感受态中保存,最近从负80取出分别在21年12月份,22年3月份存入负80的此过表达菌株划线挑单菌落培养之后发现在LB液体培养基中沉淀速度非常快,非常浓的细菌含量几个小时就都沉底了,咨询了一下微生物方向的同学说是菌株衰退,于是我扩大培养提质粒然后重新制备感受态进行转化,结果还是一样,没有改善。请问这是为什么呢?我现在唯一的办法就是重新构建载体吗?
huarenqiang5
你的这个情况最好的办法就是重新构建载体。
Dr_劉医生
还是考虑反复冻存复苏后导致的大肠杆菌株衰弱,可以不用换载体,重新培养一次细菌试试
土井挞克树
考虑还是载体存在缺陷,需要重新构建载体。
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