【求助】同源重组基因敲除假阳性

你这个考虑可能是质粒被细菌污染所导致。

有几个可能的原因：

1. 切除事件未发生：同源重组基因敲除的关键是引导同源重组切除目标基因。如果切除事件未发生，那么目标基因仍然存在于细菌菌落中，因此无法通过PCR扩增检测到。您可以考虑检查实验中的引物设计是否正确，确保引物特异性并覆盖目标基因的预期切除位点。

2. 重组效率较低：即使引导同源重组的质粒成功转化到细菌中，重组效率也可能相对较低，导致仅有部分菌落发生了目标基因的切除。这可能导致在PCR检测时只有少数菌落呈阳性。

3. 质粒插入或重组的不完全：在自杀质粒的基因敲除策略中，质粒通常会在同源重组之后在细菌染色体中整合，并取代目标基因。然而，有时可能发生插入或重组不完全的情况，导致质粒未能完全替代目标基因。这可能是导致PCR结果阴性的原因之一。

可能是质粒存在缺陷，质粒存在基因污染