• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        whole mount免疫荧光染色抗体孵育时3D细胞团散了

        相关实验:免疫组化(荧光)实验

        user-title

        dxy_4aa38auq

        3D培养的细胞球用4%PFA固定后梯度转移到MeOH中,在-20°C保存了一段时间后取出,首先在dent's bleach中孵育2h, 用MeOH洗了三遍,再放在-80和室温间切换四次进行穿膜。梯度转移回PBS后在驴血清和0.1%Triton-PBS中4度封闭一夜,第二天在封闭溶液中加抗体继续4°孵育了三天,可是拿出来的时候看不到细胞球,显微镜下可以看到细胞散了在孔的底部,这是什么原因导致的,哪一步出问题了了呢?

        wx-share
        分享

        2 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        下面是一些可能的原因:

        固定过程中使用的PFA浓度或固定时间过长可能会导致细胞球破裂。你使用了4%的PFA,这个浓度对于不同的细胞类型可能有不同的影响,过浓的PFA浓度或固定时间过长可能会破坏细胞膜,导致细胞球破裂。建议使用更低浓度的PFA,比如1% PFA,在更短时间内固定细胞。

        梯度转移过程中可能会出现问题。转移到MeOH中的过程可能会导致细胞球破裂。此外,转移到PBS的过程中,可能出现过度搅拌或过度震动的情况,也可能导致细胞球破裂。建议梯度转移时注意轻轻操作,避免搅拌过度。

        孔板处理过程中的穿膜过程可能会破坏细胞球。在处理过程中,细胞球可能会碰到孔板壁或者穿膜过程中的剪切力,导致细胞球破裂。建议在穿膜的过程中注意轻轻操作。

        封闭和抗体处理过程中可能会导致细胞球破裂。在封闭和抗体处理过程中,细胞球可能会受到温度、剪切力、抗体等多种因素的影响,导致细胞球破裂。建议在处理过程中注意细胞球的状态,减少对其的干扰。


        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑是在pbs中封闭的时间过长,或者浓度过大,可以减少封闭时间

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序