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        【求助】小鼠骨骼肌卫星细胞提取,原代细胞

        相关实验:骨骼肌观察实验

        user-title

        胡胡胡椒

        求助!

        最近在做小鼠骨骼肌卫星细胞提取,细胞长的特别慢,3-4天都看不见细胞,而且镜下看感觉细胞形态与细胞系的形态也明显不一致图片描述

        因为提取步骤也比较多,比较迷茫,不清楚应该在哪一步进行调整,或者按照什么样的思路进行调整

        跪求各位老师不吝赐教啊

        下面附上操作过程:

        1. 选取SPF级3周龄以内雄性小鼠;
        2. 脱颈处死,浸泡至75%的酒精,约10 min。
        3. 在无菌条件下分离肌肉组织。去除筋膜、血管、脂肪等组织,用含有1%双抗的PBS洗涤3次,眼科剪充分剪碎至1 mm3
        4. 在剪碎的肌肉中加入0.1% Ⅱ型胶原酶10 ml,在 37℃条件下静置消化1h,1 000转/分离心15 min后,弃上清。
        5. 再加入 0.25%胰酶10 ml,37℃消化15 min,胎牛血清终止消化,1 000 转/分离心15 min,弃上清。
        6. 加入生长培养基2 ml吹打混匀,依次通过100目、200目、400目细胞筛过滤。接种于未经多聚赖氨酸包被的培养皿中,置于培养箱。
        7. 2 h后,将第一次差速贴壁完的细胞悬液接种于经多聚赖氨酸的包被的培养瓶中,因为长的比较慢,所以第4天首次换液,之后每2天换1次液。

        参考文献中的骨骼肌卫星细胞成长图:图片描述

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        1 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可以适当延长酶消化的时间,减少其他细胞的影响

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