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        最近做实验结果一直不佳,想来求助各位有经验的大佬

        相关实验:肿瘤动物模型建立实验

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        小小梵瑰

        1、间接ELISA测大鼠血清,采血的时候是20μL+990μL1xPBS 用抗原免疫3次后第一次测血,效价不高,免疫4次第二次,有效价也不高,免疫5次第三测血基本上没效价了,怎么差别这么大啊?

        2、裸鼠成瘤实验,加基质胶皮下注射后第二天观察皮肤表面有红色砂印?而且细胞很明显没有注射时鼓了,形成白色团块,软软的,之前也遇见这种情况 最后是没成,这次还需要观察一下 估计也是没戏了,大家有没有什么好的成瘤经验啊呜呜呜

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        2 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        你要是做间接elisa实验,一定最好就是抗原蛋白质浓度不应超过 20 μg/ml,因为这将使微量滴定板上的大部分可用位点饱和,确保样品所含抗原的浓度在抗体检测范围内,不然实验结果不佳。一般构建肿瘤模型,裸鼠主要保证周龄,周龄小一点好。可能是细胞状态差,活力不好,或是肿瘤细胞不易成瘤,需加入Matrigel辅助或增大接种量或更换细胞系。也可能是小鼠周龄太大,或小鼠免疫排斥,建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠

        user-title

        小小梵瑰user-title

        抗原包被是 2μg/ml浓度不算高,我这几天换了个二抗试了一下,浓度高的飞起了,我还用之前的二抗和新的二抗做了对比 ,新的二抗高了3-4倍,原来换个二抗结果完全不一样,谢谢你的解答😄😄😄

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        balalaLy

        有帮助

        裸鼠成瘤动物周龄不能太大,4-6周龄最好。还有要确保细胞活性,不能有污染,细胞准备好之后尽量在半小时到1小时内打完。

        user-title

        小小梵瑰user-title

        细胞活度还挺好的,因为是刚传代出来的新细胞,之前没做过这个细胞,就是看文献选择这个细胞成瘤,跟我平常做的细胞成瘤就不太一样了,平常加了基质胶,打完第二天都鼓起老高了,这个打完都扁平的,可能是细胞的原因,谢谢小伙伴的解答哈😃😃😃😃

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