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        在下最近作⼈外周⾎流式,作表⾯及其胞内染⾊,试剂说明书说要先分离外周⾎单个核细胞再染⾊

        相关实验:药物对动物腹腔巨噬细胞的影响实验

        user-title

        Miracle星

        在下最近作⼈外周⾎流式,作表⾯及其胞内染⾊,试剂说明书说要先分离外周⾎单个核细胞再染⾊,我有时候分的红细胞⽐较多,其他的⽅法试过了,都改进的不好,我担⼼红细胞会有影响,想在分离出PBMC以后如果红细胞⽐较多的话,就⽤红细胞裂解液裂解⼀下,但是我有如下问题,希望这样做过的同志指点⼀下,感激不禁。

        (1)有⼈这样在分离PBMC以后再裂解的吗(我知道⼀般是在全⾎染⾊后再裂解红细胞)?

        (2)这样会影响流式检测吗?

        (3)⽤的裂解液配⽅是什么(最好是⾃⼰⽤过的)。

        (4)⽤法是什么{我是在如果PBMC分出来以后要是红细胞⽐较多的时候使⽤,这样要怎样把分出的PBMC稀释,加多少裂解液 裂解多长时间,裂解后洗涤⼏次等等}。

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        3 个回答

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        ⼀般是在全⾎染⾊后再裂解红细胞。这样会影响流式检测。裂解液我都是买的。

        user-title

        府宅

        有帮助

        红细胞裂解液配方:

        a) NH4Cl 80 g

        b) KHCO3 10 g

        c) Na2EDTA 3.7 g

        d) Distilled H2O 1000 mL

        2. 1N HCl or 1N NaOH(调节pH值用)

        红细胞裂解液配制步骤:

        1. 将以上a、b、c试剂溶于900ml 去离子水中;

        2. 加去离子水定容到1000ml,调节溶液pH值到7.2-7.4,用0.22um的滤器过滤2-8°C保存备用;

        3. 在制备工作液时,将此储存液稀释10倍后使用。

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        细胞裂解液的制备:碳酸氢钾(KHCO3)1.0g;氯化氨(NH4CL)8.3g;EDTA-Na2 0.037g,加双蒸水至1000ml,即工作液。

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