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问
免疫组化,一般切多少张片子,组织没有固定,冻融过,还能用吗?
土井挞克树
10-15个吧 ,没有固定冻融过最好不用了
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问
免疫组化,是否能够定量,怎么实现?
土井挞克树
可以的,先把免疫组化做了然后 用imageJ 分析
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问
心脏导管取血,经过大的血管怎么避免血管内皮损伤?
土井挞克树
操作轻柔,减少与内壁的摩擦。多加练习
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问
流式细胞检测什么时候需要去黏连?什么时候用fsc的信号去黏连,什么时候用荧光信号去黏连?
土井挞克树
在流式检测中,我们需要进行单细胞分析,有时样品中会混有两个或多个细胞的聚集体,这个时候需要去粘连
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问
检测胞内蛋白的表达水平用WB和流式细胞仪的区别是什么?
土井挞克树
WB是金标准,流式可以检测细胞膜和细胞内蛋白
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问
流式细胞仪可以测定悬浮细胞的数量吗?
juyue2010
可以的,直接进行细胞计数更便捷
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问
AnnexinV 检测细胞凋亡,流式结果图怎么看?
土井挞克树
在二维散点图上,PI 和 annexin V 分别是X和Y轴。一般认为PI单染的细胞是已经死亡的细胞,annexin V 单染的细胞是凋亡早期的细胞,而双染是凋亡中期的。需要在散点图上先画出4个象限,位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限。Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂,在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。
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问
除了熟练操作之外,还有什么方式能节约试验试剂,提高试剂使用率。
juyue2010
合理的实验设计,最少试验次数拿到结果。
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问
同一批小鼠细胞,可以用不同品牌的抗体一起孵育吗,会不会有排斥的情况?
土井挞克树
不要一起孵育,可以用剥离Buffer处理后再加另外一种抗体,在同一张膜上显色,配方园子里有;多抗是有可能有多条带的,和它是多克隆抗体有关,特异性差,会有交叉反应。
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问
我想一次染小鼠免疫细胞,包括b,t,巨噬细胞,单核细胞,孵育抗体的次序有要求吗?
土井挞克树
这个应该不分先后顺序,都可以的。
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问
流式细胞术散点图参数中FSC-A与FSC-H是什么意思
土井挞克树
fsc代表的是forward scatter,这个参数和细胞的大小成正比。A 是area的缩写,H是height的缩写。这是机器在记录信号时所采用的参数(不显示在用户界面,一般在调试机器的时候可以显示)每个细胞通过激光的时候,机器都会记录一个波状信号(一个拱形的信号),H就是这个拱的高度(代表的是信号的强度),A就是这个拱的曲线下面积,代表信号强度和细胞大小的关系。其实还应该有一个参数W,是wid
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问
流式做细胞凋亡怎么设门?
土井挞克树
通过流式细胞术分析细胞样品时,欲获得更加准确的分析结果,应用最优化的设门策略非常重要。要考虑的因素包括:1) 排除细胞碎片2) 应用合适的荧光阴性对照3) 排除死细胞4) 如果合适,使用一种共享标志物(比如 CD45 白细胞标志物或与之等效的泛-细胞群标志物)染色5) 设置必需的荧光分析点图
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问
流式抗体可以持续多长时间?
此用户已注销
流式抗体一般都是直接带荧光标记的,一般情况下4°C避光可以保存一年,勿-20°C保存,荧光基团在反复冻融之后会从抗体上脱落。
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问
怎么有针对性的选择流式抗体?
juyue2010
根据实验,确定好marker,从文献中查找相应的货号
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问
内源性过氧化物酶的灭活时间和浓度是什么?
土井挞克树
(1)一般3%过氧化氢灭活时间短点,可以10min左右;而0。3%过氧化氢则可以适当延长封闭时间,一般10~30min。
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问
小鼠th17/treg细胞怎么测?
此用户已注销
需要破膜,用适量体积的Flow Cytometry Staining Buffer重悬细胞,并上机检测并分析。注:由于染色过程中使用了细胞固定和破膜,对比起活细胞在形态上会有一定变化,因此FSC/SSC图中圈门时需要做一定调整。
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问
Triton-X100的必要性是什么
土井挞克树
1、能溶解脂质,以增加抗体对细胞膜的通透性;2、百分之一的TritonX100常用于漂洗组织标本;3、百分之零点三的TritonX100常用于稀释血清;4、百分之零点一的TritonX100常用于环介导等温扩增,配制BSA。
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问
流式做好后细胞不分群怎么搞,抗体不好吗
juyue2010
选择的marker是否合格,抗体特异性如何
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问
细胞周期实验中,转染后对比对照组结果显示 G2期比例升高,但同时S期比例也升高,如何解释结果?
土井挞克树
这个说明细胞周期中细胞增殖快。
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问
请问为了让实验结果更可靠、更完备,以及没有缀余,流式细胞实验的设计阶段有哪些注意的地方?
juyue2010
设计阶段,根据实验目的,选择合适的marker,考虑多色染色时,荧光通道避免相互干扰可能
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